發(fā)酵生產(chǎn)維生素B-,12-的檢測(cè)與提取研究.pdf

1、維生素B12廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和食品工業(yè)，主要由微生物發(fā)酵得到。本論文從應(yīng)用角度出發(fā)，對(duì)維生素B12發(fā)酵生產(chǎn)過程中檢測(cè)、提取方法進(jìn)行了初步研究，期望為維生素B12發(fā)酵工藝改進(jìn)提供參考借鑒。本論文主要進(jìn)行了以下幾個(gè)方面研究： 1.HPLC直接檢測(cè)發(fā)酵液中維生素B12含量羥基鈷胺素、脫氧腺苷鈷胺素、甲基鈷胺素是發(fā)酵產(chǎn)生維生素B12的有效形式。避光條件下，費(fèi)氏丙酸桿菌菌體經(jīng)細(xì)胞破碎后，使用高效液相色譜分析其中維生素B12各有效成分含量。該

2、檢測(cè)方法重復(fù)性好、分析速度快，可應(yīng)用于工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)維生素B12的過程監(jiān)控和檢測(cè)，本方法在指導(dǎo)維生素B12產(chǎn)生菌的定向選育方面亦有一定應(yīng)用價(jià)值。 2.維生素B12光穩(wěn)定性研究及快速檢測(cè)方法的建立脫氧腺苷鈷胺素和甲基鈷胺素對(duì)光線十分敏感，光照處理后會(huì)完全轉(zhuǎn)化為羥基鈷胺素。羥基鈷胺素和氰基鈷胺素對(duì)光線相對(duì)穩(wěn)定。考察了不同光源對(duì)脫氧腺苷鈷胺素和甲基鈷胺素光解轉(zhuǎn)化影響，發(fā)現(xiàn)其光解速率與光照強(qiáng)度成正比。 費(fèi)氏丙酸桿菌細(xì)胞破碎液經(jīng)光照

3、處理，發(fā)酵產(chǎn)生的維生素B12各組分迅速轉(zhuǎn)化為單一、穩(wěn)定的羥基鈷胺素。使用HPLC檢測(cè)光解處理后的細(xì)胞破碎液，通過光解轉(zhuǎn)化的羥基鈷胺素含量反映維生素B12總含量。此測(cè)定方法準(zhǔn)確、快速，操作過程不需嚴(yán)格避光，更具工業(yè)應(yīng)用推廣性。 3.費(fèi)氏丙酸桿菌細(xì)胞破碎提取維生素B12考察超聲波法、煮沸法、微波加熱法、高壓均質(zhì)法破碎費(fèi)氏丙酸桿菌動(dòng)力學(xué)過程，比較不同方法提取維生素B12效率。使用煮沸法和微波加熱法提取率最高，并且處理過程中可有效去除蛋

4、白質(zhì)。煮沸法提取維生素B12處理量大，操作簡(jiǎn)便，適用于工業(yè)生產(chǎn)。微波加熱法提取維生素B12所需設(shè)備簡(jiǎn)單，處理時(shí)間短，可用于HPLC檢測(cè)過程中樣品預(yù)處理。4.大孔樹脂吸附法提取純化發(fā)酵液中維生素B12費(fèi)氏丙酸桿菌細(xì)胞破碎液經(jīng)光解處理后，發(fā)酵產(chǎn)生的維生素B12完全轉(zhuǎn)化為羥基鈷胺索形式。比較了4種大孔吸附樹脂對(duì)羥基鈷胺素的靜態(tài)吸附、解吸性能，考察了溫度和pH對(duì)樹脂的吸附和解吸性能影響。結(jié)果表明CAD45樹脂對(duì)于羥基鈷胺素具有良好的吸附能力，并