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文檔簡介
1、該文系統(tǒng)研究了不同縮合劑對固相化學(xué)合成胸腺素α<,1>的影響,并對其合成工藝和分離純化工藝進(jìn)行優(yōu)化.最佳的合成工藝為:以HBTU為縮合劑,以2-4當(dāng)量的試劑(前11個(gè)氨基酸為2當(dāng)量,后續(xù)的為4當(dāng)量),平均11h/氨基酸的縮合速度化學(xué)合成胸腺素α<,1>;縮合后和脫保護(hù)后的洗滌次數(shù)均以6次為宜.該條件下合成的胸腺素α<,1>的粗品收率為89.9%,純度為31.2%,目標(biāo)物胸腺素α<,1>的收率為28.0%,單位成本為2.49 RMB/mg
2、胸腺素α<,1>.分離純化工藝為:首先以離子交換層析法對胸腺素α<,1>粗品進(jìn)行初步的分離純化,以除去粗品中大量的雜質(zhì).采用DEAE Sepharose Fast Flow填料,pH5.8的0.02mol/L磷酸鈉緩沖液以及pH5.8的0.5mol/L氯化鈉和0.02mol/L磷酸鈉緩沖液,上樣量為50mg.經(jīng)層析后產(chǎn)品的純度提高到75%,收率為60%.然后以反相高效液相層析法對胸腺素α<,1>進(jìn)行最終的純化.采用C18柱,以0.1%T
3、TA為離子對試劑,乙腈線性梯度洗脫,上樣量為50mg.反相層析后產(chǎn)品的純度達(dá)到95%,收率為60%.兩步純化的總收率為36%,純度符合要求,純化規(guī)模達(dá)到半制備水平,為胸腺素α<,1>的工業(yè)化奠定了基礎(chǔ).此外,還首次K.C.Chou等篩選的抗SARS八肽進(jìn)行了探索和研究,著重考察了不同的縮合劑和縮合時(shí)間對化學(xué)合成抗SARS八肽的影響,建立八肽的合成工藝和分離純化工藝.其最佳的合成工藝為:以HBTU為縮合劑,以2當(dāng)量的試劑,平均5h/氨基酸
4、的縮合速度化學(xué)合成八肽.該條件下合成的八肽的粗品收率為87.6%,純度為72.8%,目標(biāo)物八肽的收率為63.8%,單位成本為1.23RMB/mg八肽.其分離純化工藝為:以制備型RP-HPLC對八肽進(jìn)行分離純化,采用C18柱,以0.1%TFA為離子對試劑,乙腈線性梯度洗脫,上樣量為10mg.反相層析后產(chǎn)品的純度達(dá)到95%,符合對純度的要求,收率為65%.活性測定結(jié)果表明八肽對SARS病毒有很強(qiáng)的抑制作用,具有開發(fā)為治療SARS的多肽藥物的
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