八種海參中主要海參皂苷的結(jié)構(gòu)特性研究.pdf

1、海參(sea cucumber)是我國(guó)一種傳統(tǒng)的海洋滋補(bǔ)品,富含多種生理活性成分,具有較高的食用和藥用價(jià)值。海參皂苷是海參體內(nèi)最重要的活性成分之一,具有抗腫瘤、抗真菌、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞毒作用和溶血作用等多種生理活性。本論文對(duì)仿刺參中的皂苷組分做了分離鑒定,并采用ESI-MS的方法對(duì)其質(zhì)譜的裂解規(guī)律進(jìn)行了研究,采用HPLC的方法建立了仿刺參皂苷指紋圖譜,隨后成功將此方法延伸到了其他8種海參的皂苷特征圖譜和結(jié)構(gòu)分析中。本論文的研究和結(jié)果為海參

2、品質(zhì)的評(píng)價(jià)、海參種類的鑒別以及建立海參質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)提供了理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù),對(duì)促進(jìn)海參產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。本文主要內(nèi)容包括以下幾個(gè)部分:
　　 1.采用大孔樹脂、硅膠柱層析和半制備HPLC技術(shù),從仿刺參(Apostichopusjaponicus)體壁中分離得到6種海參皂苷化合物,根據(jù)化合物的理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù),共鑒定了3種皂苷化合物的結(jié)構(gòu),分別為:cladoloside B,holotoxin A1和hol

3、otoxin B1。
　　 2.采用電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(ESI-TOF-MS),在負(fù)離子檢測(cè)方式下,對(duì)9種皂苷化合物的質(zhì)譜裂解途徑進(jìn)行了研究。通過ESI-MS產(chǎn)生的[M.H]ˉ/[M-Na]ˉ獲得了相應(yīng)化合物的分子質(zhì)量信息。對(duì)[M-H]ˉ/[M-Na]ˉ進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離(CID)獲得了相應(yīng)化合物的裂解途徑信息。在二級(jí)質(zhì)譜中,糖鏈上無硫酸酯基取代的皂苷發(fā)生糖苷鍵的斷裂,連續(xù)丟失糖鏈的末端單糖,最后生成苷元的特征碎片離子,這些特

4、征有助于皂苷的結(jié)構(gòu)解析。糖鏈上有硫酸酯基取代的皂苷不發(fā)生糖苷鍵的斷裂,而是發(fā)生了苷元的裂解,生成了更加穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。將其進(jìn)行脫硫酸化處理后,其脫硫產(chǎn)物的MS/MS圖譜中出現(xiàn)糖鏈上單糖順序脫落形成的碎片峰。根據(jù)已知皂苷的二級(jí)質(zhì)譜裂解規(guī)律,對(duì)仿刺參體內(nèi)提取出的3種含量較少,無法進(jìn)行核磁分析的皂苷單體進(jìn)行了質(zhì)譜分析,推測(cè)出了3種皂苷的結(jié)構(gòu)。
　　 3.建立了仿刺參(Apostichopus japonicus)皂苷類成分的HPLC指紋圖

5、譜,為仿刺參的質(zhì)量控制提供了新的方法。實(shí)驗(yàn)采用固相萃取(SPE)制備供試品溶液,選用Zorbox SB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,柱溫30℃,流速1.0 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為205 nm。分析了不同產(chǎn)地的10批仿刺參樣品,采用國(guó)家藥典委員會(huì)推薦的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004A版)”處理譜圖,確定了6個(gè)共有峰。計(jì)算了10個(gè)樣本間的指紋圖譜相似度,所

6、得相似度計(jì)算結(jié)果均大于0.97。該方法具有良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性,可用于仿刺參的質(zhì)量控制。
　　 4.采用SPE-HPLC方法研究了8種海參的總皂苷特征圖譜,比較不同種海參問皂苷的組成及含量差異,為海參的品種鑒定提供依據(jù)。使用Zorbax SB-C18(250mm×4.6 mm,5μm)色譜柱,以乙腈-0.1％的三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫,柱溫30℃,流速1.0 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)205nm。對(duì)不同海參體內(nèi)皂苷類成分進(jìn)行H

7、PLC分析,所得圖譜特征性強(qiáng),8種海參的各皂苷成分均得到很好的色譜分離。結(jié)果表明不同海參體內(nèi)的皂苷組成及含量有明顯差異,所建立的方法簡(jiǎn)便、可靠,可用于海參的品種鑒定。
　　 5.采用HPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù),對(duì)8種海參體內(nèi)主要的皂苷類成分進(jìn)行了定性鑒定。選用Eclipse XDB-C18色譜柱(150mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.1％碳酸氫銨水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,通過與電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用獲得各皂苷成分的精