革皮氏海參總皂苷促進(jìn)小鼠骨髓造血機(jī)能的作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、海參皂苷是海參的主要次生代謝產(chǎn)物,是海參體內(nèi)特有的一類三萜類化合物。本實驗通過急性毒性、30d喂養(yǎng)實驗研究革皮氏海參總皂苷對小鼠或大鼠的一般毒性以及長期攝入對生長發(fā)育產(chǎn)生的有害效應(yīng),并檢測其毒作用性質(zhì)和靶器官,觀察長期攝入對機(jī)體造成的危害。在確定海參皂苷的毒作用性質(zhì)及半數(shù)致死量(median lethal dose,LD50)的基礎(chǔ)上,在其安全性應(yīng)用范圍內(nèi)來研究海參皂苷對小鼠骨髓造血機(jī)能的促進(jìn)作用。本實驗采用連續(xù)3次腹腔注射環(huán)磷酰胺(C

2、yclophosphamide,Cy)的方法建立骨髓抑制小鼠模型。采用0.5％羧甲基纖維素調(diào)制的革皮氏海參總皂苷灌胃模型小鼠,研究其對小鼠骨髓造血功能的影響,并對其作用機(jī)理進(jìn)行了較系統(tǒng)和深入地研究。主要研究結(jié)果如下:
　　 革皮氏海參總皂苷對小鼠的LD50:雄性為1.08g/kg,雌性為1.1 g/kg。一次性灌胃海參皂苷,小鼠血清中尿素氮(serum urea nitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,Cr)、谷

3、草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotarnferase,AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alaninetransaminase,ALT)含量同正常對照組無顯著差異,說明海參皂苷對小鼠腎臟和肝臟功能無明顯損傷效應(yīng)。30d喂養(yǎng)實驗顯示,海參皂苷對大鼠血液生化學(xué)和尿液生化學(xué)指標(biāo)均無顯著影響,說明其對大鼠肝臟,腎臟和心血管等器官無明顯毒性損傷。另外,海參皂苷明顯促進(jìn)雄性大鼠外周血中白細(xì)胞(white bloodcell,WBC)數(shù)和血小板數(shù)(pla

4、stocyte,PLT)增加。
　　 采用細(xì)胞培養(yǎng)和組織培養(yǎng)方法,研究海參皂苷對骨髓造血功能的影響。結(jié)果表明,海參總皂苷促進(jìn)小鼠WBC、RBC、PLT和血紅蛋白(hemoglobin,Hb)含量以及網(wǎng)織紅細(xì)胞(reticulocyte,RET)數(shù)量,促進(jìn)骨髓有核細(xì)胞(bone marrownucleated cell,BMNC)分裂增殖,刺激造血干細(xì)胞(hemopoietic stem cell,HSC)的增殖與分化,對體外培養(yǎng)

5、粒-單系(P＜0.01)、紅系(P＜0.05)和巨核系祖細(xì)胞(p＜0.01)集落生成有明顯的促進(jìn)作用;同時海參皂苷刺激肺、脾臟和腹腔巨噬細(xì)胞等組織中分泌多種造血生長因子,促進(jìn)小鼠骨髓造血。
　　 利用流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)法檢測海參總皂苷對小鼠骨髓細(xì)胞細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果顯示,海參皂苷促進(jìn)骨髓細(xì)胞從S期進(jìn)入到G2/M

6、期,同時促進(jìn)細(xì)胞G2/M期調(diào)控點cyclin B1基因的表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂;提高抑制凋亡基因bcl-2和bcl-xl mRNA的表達(dá)(p＜0.01,p＜0.01),抑制細(xì)胞凋亡。說明海參皂苷可通過調(diào)整細(xì)胞周期、促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂、抑制細(xì)胞凋亡,來促進(jìn)小鼠骨髓造血功能。
　　 通過RT-PCR法檢測小鼠骨髓細(xì)胞造血生長因子粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子(granulocyre-macrophage colony-stimulating

7、factor,GM-CSF)、促紅細(xì)胞生成素受體(erythropoietin receptor,EPOR)和血小板生成素(thrombopoietin,TPO)mRNA表達(dá)。結(jié)果顯示,海參皂苷顯著促進(jìn)骨髓細(xì)胞EPOR(P＜0.05)、GM-CSF(p＜0.01)和TPO mRNA(p＜0.01)的表達(dá),推測海參皂苷通過促進(jìn)小鼠骨髓細(xì)胞合成和分泌EPO、GM-CSF或TPO,有效促進(jìn)EPO、GM-CSF或FPO與其相應(yīng)受體結(jié)合,刺激骨髓