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文檔簡介
1、阿爾茲海默病是一種常發(fā)于老年期的慢性進行性神經退行性疾病,表現為記憶力下降、認知障礙等不可逆退化,病理學特征為神經纖維纏結、老年斑以及神經元凋亡等。阿爾茲海默病的發(fā)病機制還未完全清楚,目前已形成多種假說,近年來氧化應激假說越來越受到關注。海參作為佐膳珍品,具有多種活性成分,如海參多糖、海參皂苷、海參腦苷脂、海參磷脂等,目前有關海參活性成分在神經保護和腦功能方面的研究還鮮見報道。本實驗分離提取了海參中的主要活性成分——海參多糖、海參皂苷、
2、海參腦苷脂和海參磷脂,建立體外模型評價了其對神經細胞氧化損傷的保護作用,在此基礎上利用動物模型進一步評價了海參磷脂在神經保護和腦功能方面的作用,并對其作用機制進行了探討。主要研究結果如下:
本文首先對海參活性成分的神經細胞毒性進行了篩選,采用MTT法觀察各種海參活性成分對神經細胞PC12的影響。結果表明,海參腦苷脂對PC12細胞的生長無明顯影響,海參磷脂可促進神經細胞的增長,因此后期的實驗以海參腦苷脂和海參磷脂為研究對象。
3、r> 本文采用過氧化氫(H2O2)和叔丁基過氧化氫(t-BHP)分別誘導 PC12細胞氧化損傷建立神經細胞體外氧化損傷模型,研究海參腦苷脂和海參磷脂的神經保護作用及其作用機制。實驗結果發(fā)現,H2O2和t-BHP使PC12細胞處于顯著的氧化損傷狀態(tài),模型建立成功;海參腦苷脂和海參磷脂處理后增加PC12細胞的存活率,細胞形態(tài)也有所恢復,表明海參腦苷脂和海參磷脂對PC12細胞氧化損傷具有保護作用;機制研究結果顯示,海參腦苷脂和海參磷脂可減少
4、細胞內LDH的漏出,保護細胞膜的完整性,提高細胞內T-AOC和SOD的活性,增加細胞的抗氧化能力,下調促凋亡基因Bax、Caspase-9和Caspase-3,促進抗凋亡基因Bcl-2的表達,抑制神經細胞凋亡。該實驗結果提示,海參腦苷脂和海參磷脂的神經細胞氧化損傷保護機制可能依賴于其抗氧化活性和抗凋亡活性。
在細胞實驗的基礎上,本文選取了海參磷脂為研究對象,利用快速老化小鼠SAMP8和東莨菪堿致小鼠癡呆為動物模型,通過敞箱實驗
5、、Barnes迷宮、Morris水迷宮等多種行為學測定方法,進一步研究海參磷脂對阿爾茲海默病的影響。實驗結果顯示,SAMP8小鼠存在焦慮現象,海參磷脂對此的改善作用并不明顯;SAMP8小鼠和東莨菪堿致小鼠癡呆兩種模型小鼠均表現出顯著的學習記憶能力障礙,Barnes迷宮實驗中海參磷脂可縮短模型小鼠找到目標箱的潛伏期,減少錯誤次數;Morris水迷宮實驗海參磷脂可減小SAMP8小鼠找到隱蔽平臺的潛伏期,增加穿越平臺次數,延長其在目標象限的停
6、留時間。以上結果表明海參磷脂可改善阿爾茲海默病模型小鼠的學習和記憶障礙。
結合動物實驗和細胞實驗的結果,本文測定了快速老化小鼠SAMP8腦組織、肝臟和血清中的氧化應激指標,進一步研究了海參磷脂改善老年癡呆小鼠腦功能的機制。結果發(fā)現,SAMP8小鼠腦組織處于嚴重的氧化應激狀態(tài),氧化損傷顯著強于肝臟和血清;海參磷脂的攝食可明顯降低 MDA、8-OHdG、8-oxo-G和NO的含量,提高SOD活力,抑制NOS活性。本研究結果表明攝食
7、海參磷脂對癡呆小鼠學習記憶障礙的改善作用與其抑制脂質、DNA和RNA的過氧化,調節(jié)腦內氧化應激狀態(tài),抑制NO的細胞毒性,減少神經細胞凋亡作用有關,且此作用機制與體外細胞實驗中的結論一致。
本文首次系統(tǒng)研究了海參中活性成分的神經保護功效,發(fā)現了海參腦苷脂和海參磷脂對神經細胞氧化損傷具有保護活性,海參磷脂可改善阿爾茲海默病模型小鼠的學習記憶能力障礙,并通過體內體外實驗初步闡明其作用機制。本文為海參活性成分在阿爾茲海默病的治療與預防
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