食品中L-羥脯氨酸含量的測定方法的實驗研究.pdf

1、近年來，國內(nèi)外多有食品中添加動物水解蛋白用以提高食品中的蛋白質(zhì)含量或氨基酸含量的報道。于是，有些不法分子利用皮革下腳料等水解制成劣質(zhì)動物水解蛋白，也就是我們常說的皮革水解蛋白。近一時期，個別企業(yè)為降低生產(chǎn)成本，將皮革水解蛋白摻入到食品中以降低原料的消耗量，這一摻假手法比較隱蔽，用常規(guī)的檢測方法很難鑒別。皮革水解蛋白一般從廢舊皮革制品或毛發(fā)中提取，在檢測過程中直接測定食品中的鉻等重金屬受樣品自身干擾較大，而動物水解蛋白的特有成分為L-羥脯

2、氨酸和羥賴氨酸，羥脯氨酸(Hydroxypro1ine，HYP)為非必需氨基酸，是機體膠原蛋白（動物水解蛋白）的主要成分之一，含量相對穩(wěn)定，它占膠原蛋白氨基酸總量的10％以上，是衡量組織膠原含量的特異性指標之一，幾乎所有的HYP都存在于膠原中，被認為是膠原中的特征性氨基酸，而大豆蛋白與乳蛋白中不含此成分。因此，HYP含量的測定已成為鑒定食品中是否添加動物水解蛋白成分的重要手段。
　　 目前，關(guān)于食品中羥脯氨酸的檢測國家只有《GB

3、/T9695.23-2008肉與肉制品羥脯氨酸含量測定》以及衛(wèi)生部門關(guān)于《乳與乳制品中動物水解蛋白鑒定--L-羥脯氨酸含量測定法》的非標方法，另外，醫(yī)學(xué)上也有很多關(guān)于羥脯氨酸測定方法的報道，但是，這些方法只針對某一單一品種的食品或醫(yī)學(xué)樣品，前處理方法比較單一，局限性較強，不能覆蓋所有食品的檢測，因此，迄今為止，國內(nèi)還沒有較好的檢測食品中L-羥脯氨酸的方法。
　　 本方法為紫外分光光度計測定法，在借鑒現(xiàn)有方法的基礎(chǔ)上，采集各種含氮

4、的食品樣品，通過大量的實驗，發(fā)現(xiàn)影響食品中羥脯氨酸測定的主要因素很多，如樣品的重量、顏色、水解條件、時間，氧化時間、顯色溫度等，其中膠原蛋白水解的完全與否以及樣品的顏色對測定的干擾最為重要，經(jīng)過多次論證發(fā)現(xiàn)酸性條件下作用最強，利于蛋白的酸解，通過對酸水解條件的優(yōu)化，使用優(yōu)化后的條件測定羥脯氨酸縮短了測定時間，簡化了操作。對于消除樣品自身顏色對實驗的干擾方面，我們采用了活性炭和硅藻土混比的方法對樣品進行脫色，基本消除了干擾。所做標準曲線斜