自身免疫性肝炎小鼠IL-17和Foxp3的表達及其意義.pdf

1、目的:
　　觀察自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)小鼠白介素-17(interleukin-17，IL-17)和叉頭狀轉錄因子3(forkhead transcription factor，Foxp3)在肝臟及腸道的表達情況，并在此基礎上探討AIH小鼠肝臟與腸道免疫損傷的關系以及輔助性T細胞17型(T help cell17，Th17)和CD4+CD25+調節(jié)性T細胞(regulatory CD4+

2、CD25+T cells，Tregs)在AIH發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:
　　1.造模雌性Balb/c小鼠6～7周齡，共12只，隨機分為實驗組（6只）與對照組（6只）。實驗組小鼠經尾靜脈注射刀豆蛋白A(ConA)12.5mg/kg，每周一次，連續(xù)注射4周;對照組不作處理，兩組飼養(yǎng)環(huán)境相同。
　　2.4周后處死小鼠并取其肝臟及小腸組織標本速凍，采用RT-PCR方法檢測IL-17及Foxp3在肝臟及小腸的表達情況;取肝

3、臟及小腸組織經10％甲醛固定，常規(guī)包埋、切片后行蘇木精-伊紅(HE)染色病理檢查及免疫組織化學染色檢測IL-17、Foxp3表達情況。
　　3.比較分析實驗組及對照組肝臟及小腸組織IL-17、Foxp3表達情況，對比兩組小鼠肝臟及小腸炎癥情況，探討IL-17和Foxp3在AIH發(fā)病過程中的作用。
　　4.所有資料應用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1.成

4、功建立小鼠AIH實驗動物模型。實驗組小鼠肝臟HE染色顯示肝臟組織的炎癥反應主要表現為大量的淋巴細胞以及少量的中性粒細胞的浸潤，肝小葉結構明顯破壞，出現肝細胞水腫、氣球樣變、點狀壞死甚至碎片狀壞死等表現;而對照組肝組織結構基本正常。
　　2.RT-PCR結果顯示，實驗組小鼠肝組織中IL-17mRNA基因的表達明顯高于對照組(3.79±0.90 VS1.00±0.00)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);實驗組小鼠肝組織中的Foxp3

5、mRNA基因的表達明顯低于對照組(0.13±0.03 VS1.00±0.00)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3.RT-PCR結果顯示，實驗組小鼠小腸組織中IL-17mRNA基因的表達明顯高于對照組(4.32±1.00 VS1.00±0.00)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);實驗組小鼠小腸組織中的Foxp3mRNA基因的表達明顯低于對照組(0.21±0.13 VS1.00±0.00)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)

6、。
　　4.病理組織切片HE染色發(fā)現，實驗組小腸組織病理評分為中重度炎癥表現，對照組為無到輕度炎癥表現。
　　5.免疫組織化學染色顯示，實驗組小鼠肝組織及小腸組織中IL-17的表達明顯上調，而對照組肝組織及小腸組織中沒有或僅有少量IL-17表達（肝中評分4.83±1.17 VS0.33±0.52;小腸中評分6.83±1.17 VS0.67±0.52）;對照組小鼠肝組織及小腸組織中可見散在分布的Foxp3表達，而實驗組小鼠肝組

7、織及小腸組織中雖有大量淋巴細胞浸潤，但表達的Foxp3明顯少于對照組，且染色變淺(肝中評分0.50±0.84 VS1.83±0.75;小腸中評分1.17±0.75 VS5.17±1.47)。
　　6.相關性分析結果顯示:肝組織和小腸組織中IL-17m RNA表達呈正相關(r=0.903，P＜0.05);肝組織和小腸組織中Foxp3mRNA表達呈正相關(r=0.0.973，P＜0.05)。
　　結論:
　　1.AIH小鼠

8、肝組織中IL-17表達顯著升高，提示Th17上調;AIH小鼠肝組織中Foxp3表達顯著降低，提示Tregs下調。
　　2.AIH小鼠小腸組織中IL-17表達顯著升高，提示Th17上調;AIH小鼠小腸組織中Foxp3表達顯著降低，提示Tregs下調。
　　3.AIH小鼠肝組織和小腸組織Th17上調趨勢一致，AIH小鼠肝組織和小腸組織Tregs下調趨勢一致，提示肝臟免疫損傷和腸道免疫損傷之間存在某種關系，但具體機制未明，有待進一