Foxp3基因在胃癌的表達及其意義.pdf

1、目的:翼狀螺旋轉錄因子P3(Foxp3) 高表達于CD4+CD25+調節(jié)性T細胞(Treg)并在介導抑制功能方面發(fā)揮著重要作用。最近，F(xiàn)oxp3 不斷被證實表達于多種類型的腫瘤細胞，但是胃癌還未見報道。通過本研究擬探討：胃癌中是否存在Foxp3轉錄物和成熟蛋白的表達；在共培養(yǎng)體系中，效應T細胞增殖的阻滯是否與Foxp3的表達有關。從而進一步揭示腫瘤細胞參與免疫逃逸的機制及發(fā)掘Foxp3 潛在的臨床應用價值。 方法:根據(jù)Treg細

2、胞表達Foxp3的特點，以此為陽性對照，建立PCR、流式細胞術、Western blot和免疫組化等Foxp3的檢測方法并進一步分析其在胃癌的表達水平和分布特點。利用CD4+CD25+CD127low/-和CD4+CD25-CD127+作為表面標志，分選Treg細胞和效應T細胞，評價胃癌細胞對效應T細胞增殖的抑制能力。通過使用transwell 裝置分隔共培養(yǎng)的胃癌細胞/Treg細胞和T細胞，進一步探討增殖阻滯是否依賴細胞間接觸的方式。

3、 結果: ①胃癌中Foxp3基因的表達：通過PCR、流式細胞術、Western blot等檢測方法，檢測到Foxp3mRNA和蛋白在各類型細胞的表達水平呈現(xiàn)一定的模式：PBMC(Treg)>BGC>SGC>MGC>GES-1(正常對照)，其中胃癌細胞Foxp3 表達水平明顯高于正常對照GES-1，但低于PBMC(Treg)的Foxp3 表達水平。Foxp3 免疫組化也證實了胃癌微環(huán)境中浸潤調節(jié)性T細胞和Foxp3+胃癌細

4、胞的存在，正常胃組織未見陽性染色。 ②胃癌細胞抑制效應T細胞的增殖：在運用流式細胞術成功分選Treg細胞和效應T細胞的基礎上，體外共培養(yǎng)實驗表明，當Treg細胞和效應T細胞的比例為1:1時，Treg細胞能明顯抑制效應T細胞增殖；而且，F(xiàn)oxp3+胃癌細胞也具有免疫抑制活性，雖然相比Treg細胞其活性較弱，但明顯高于正常對照GES-1。此外，相比transwell組將兩類共培養(yǎng)細胞分隔開，直接接觸組Foxp3+細胞對效應T細胞的增