中國漢族強(qiáng)直性脊柱炎家系遺傳模式和新的致病基因研究.pdf

1、第一部分強(qiáng)直性脊柱炎全基因組掃描的Meta分析
　　 目的：綜合分析強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)家系的全基因組掃描基因定位的結(jié)果，探討進(jìn)一步研究和確定AS的遺傳易感位點(diǎn)的思路和方法。
　　 方法：采用基因組尋證Meta分析(genome search meta analysis，GSMA)法，對(duì)符合該方法分析的4個(gè)AS家系的全基因組掃描結(jié)果包括參數(shù)連鎖分析和非參數(shù)連鎖分析的結(jié)果進(jìn)行分

2、析。根掘連鎖分析的最大值被賦值并按降序排列，從而計(jì)算出總的等級(jí)分值(Rsumrnk)。根據(jù)每個(gè)研究的受累個(gè)體數(shù)進(jìn)行加權(quán)GSMA對(duì)結(jié)果進(jìn)行修正。本研究共有479個(gè)家系，1151個(gè)AS患者?？偟牡燃?jí)分析概率(Psumrnk)和有序的等級(jí)分析概率(Pord)＜0.05認(rèn)為可能含有易感區(qū)域，GSMA Psumrnk＜0.000417.時(shí)，認(rèn)為在全基因組連鎖中有顯著意義。
　　 結(jié)果：GSMA顯示10組結(jié)果的Psumrnk和Pord均小于

3、0.05，表明這些組內(nèi)最可能含有AS的易感基因位點(diǎn)，這些組分別是：6.2，16.3，6.1，3.3，6.3，16.4，10.5，17.1，2.5，2.9。GSMA生成的具有顯著意義的全基因組連鎖分析的證據(jù)位于6p22.3-p21.1(BIN6.2，Psumrnk＜0.000417)，包含HLA位點(diǎn)。
　　 結(jié)論：本GSMA研究進(jìn)一步證實(shí)了HLA位點(diǎn)是AS的主要致病基因易感區(qū)域，并初步提供非HLA區(qū)域包括16q，3p，10q，2p

4、，17p和2q證據(jù)。
　　 第二部分強(qiáng)直性脊柱炎家系遺傳模式的研究
　　 目的：探索中國漢族強(qiáng)直性脊柱炎大家系的遺傳模式和遺傳參數(shù)，尋求家系中可能的疾病傳遞方式。
　　 方法：采用系譜分析和分離分析多元logistic回歸模型對(duì)3個(gè)家系進(jìn)行遺傳模式評(píng)估。
　　 結(jié)果：在強(qiáng)直性脊柱炎一個(gè)大家系中，孟德爾顯性遺傳(模型Ⅴ多因素+顯性與模型Ⅲ-多因素+孟德爾比較)，x2=0.06，df=1，p=0.81。

5、>　　 結(jié)論：首次證實(shí)在中國漢族AS大家系中，該病存在一種常染色體顯性遺傳的傳遞模式。
　　 第三部分中國漢族強(qiáng)直性脊柱炎新的致病易感基因區(qū)域的研究
　　 目的：通過對(duì)中國漢族AS家系的全基因組掃描及后續(xù)的精細(xì)定位，尋找AS的新的致病易感基因區(qū)域。
　　 方法：用382個(gè)常染色體微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)AS家系進(jìn)行全基因組掃描，并以基因分型結(jié)果進(jìn)行參數(shù)連鎖分析。參數(shù)選擇根據(jù)大家系的分離分析結(jié)果。對(duì)有提示連鎖位點(diǎn)的區(qū)域，進(jìn)一

6、步在附近一定遺傳距離選擇更密集的微衛(wèi)星標(biāo)記，從而把疾病易感區(qū)域縮窄范圍，以便為下一步候選基因的篩查提供依據(jù)。
　　 結(jié)果：家系C的全基因組掃描及精細(xì)定位連鎖分析結(jié)果顯示，最高LOD值為4.02(θ=0)，在D6S273處獲得。家系A(chǔ)和家系B共同定位于2號(hào)染色體長臂D2S377-D2S1349這一6cM的區(qū)域。兩家系最大的異質(zhì)性LOD值為12.41，其中，A家系的最高LOD值為3.26，而B家系的最高LOD值為2.13，均于D2S

7、2228位點(diǎn)獲得。
　　 結(jié)論：在中國漢族AS家系中，HLA—B區(qū)域是該病致病基因重要的易感區(qū)域；并發(fā)現(xiàn)2q36是非MHC區(qū)外該病新的致病易感基因區(qū)域之一。
　　 第四部分中國漢族強(qiáng)直性脊柱炎新的致病基因研究
　　 目的：通過候選基因的測(cè)序篩選，尋找AS的新的致病基因，并研究疾病相關(guān)的基因功能。
　　 方法：通過測(cè)序的方法對(duì)家系A(chǔ)和B所在的易感區(qū)域內(nèi)的33個(gè)已知基因進(jìn)行測(cè)序?qū)ふ彝蛔凕c(diǎn)。對(duì)發(fā)現(xiàn)的新的致病基因

8、，采用RNA干擾基因沉默的方法研究疾病相關(guān)的基因功能，觀察基因沉默后相應(yīng)的骨代謝指標(biāo)和炎癥指標(biāo)的變化。
　　 結(jié)果：在家系A(chǔ)中發(fā)現(xiàn)胰島素受體底物1(insulin receptor substrate1，IRS1)的一個(gè)突變點(diǎn)1738 C→G與疾病共分離。這個(gè)突變點(diǎn)在不同物種中高度保守。在IRS1干擾后腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor—alpha，TNF-α)在MG-63細(xì)胞株持續(xù)低表達(dá)，而在MG-63