早期嗅覺剝奪對(duì)SD大鼠海馬的影響的研究.pdf

1、目的:嗅覺系統(tǒng)是人類感覺系統(tǒng)中最原始、最重要的系統(tǒng)之一，嗅覺是一種感覺，人和動(dòng)物通過嗅覺來分辨氣味、辨別種族、聯(lián)絡(luò)同類等;是動(dòng)物覓食、認(rèn)物、情感交流及求偶的重要途徑之一，海馬腦區(qū)有著管理學(xué)習(xí)記憶的能力，而學(xué)習(xí)記憶是高級(jí)哺乳動(dòng)物所特有的高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)。海馬腦區(qū)不僅和陳述記憶有關(guān)，而且與空間辨別性記憶也有著密切聯(lián)系。本文就嗅覺剝奪對(duì)海馬回影響、大腦中樞神經(jīng)發(fā)育初期由于嗅覺損傷所致的發(fā)育遲緩與學(xué)習(xí)記憶及行為異常可能的作用進(jìn)行探討。
　　方

2、法:分別取SD大鼠36只（本實(shí)驗(yàn)大鼠由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），體重在75-115g之間，平均體重為100±12克。上述實(shí)驗(yàn)大鼠均在籠中喂養(yǎng)，保持在室溫23℃-25℃之間，利用隨機(jī)數(shù)字表法將上述研究對(duì)象分為空白對(duì)照組、嗅覺剝奪組，每組18只。
　　結(jié)果:
　　1、一般形態(tài)觀察
　　研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)嗅覺剝奪組此時(shí)幼鼠表現(xiàn)安靜、體形偏小、反應(yīng)遲鈍且無趨利避害意識(shí)，對(duì)其進(jìn)行稱重發(fā)現(xiàn)其平均體重為67.16±4.98g。對(duì)照組

3、表現(xiàn)活躍、體態(tài)發(fā)展正常、反應(yīng)靈敏、存在趨利避害意識(shí)，對(duì)其進(jìn)行稱重后發(fā)現(xiàn)，其平均體重為89.06±5.11g。對(duì)兩組的體重進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)存在差異，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.11，P=0.03)。
　　2、尼氏染色結(jié)果
　　空白對(duì)照組中海馬齒狀回神經(jīng)元數(shù)目為(1048.1)，嗅覺剝奪組中海馬齒狀回神經(jīng)元數(shù)目為(947.9)，兩組之間比較有差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　3、MORRIS水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　

4、　3.1定位航行實(shí)驗(yàn)
　　研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)空白對(duì)照組的逃避潛伏期為4.9±1.2小時(shí)，嗅覺剝奪組的逃避潛伏期為8.8±1.1小時(shí)，對(duì)兩組進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩組結(jié)果之間有差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.88，P=0.02）。
　　3.2空間探索實(shí)驗(yàn)
　　研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)上述兩組患者進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):空白對(duì)照組的空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果較嗅覺剝奪組有所增加，兩組患者進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)有差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4、免

5、疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果
　　4.1δ亞基免疫組化結(jié)果
　　免疫組織化學(xué)染色顯示，空白對(duì)照組和嗅覺剝奪組中NeuN陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在海馬齒狀回的顆粒細(xì)胞層或多形層，兩組在分子層均有少量分布，不同時(shí)間點(diǎn)下其NeuN陽(yáng)性細(xì)胞分布不同，4w后，空白對(duì)照組與嗅覺剝奪組在亞基免疫組化結(jié)果方面存在差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　4.2累積吸光度法分析結(jié)果
　　運(yùn)用累積吸光度法(IOD)分析α5亞基免疫組化結(jié)果，實(shí)驗(yàn)

6、結(jié)果發(fā)現(xiàn)空白對(duì)照組與嗅覺剝奪組在亞基免疫組化結(jié)果方面存在差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5、熒光定量PCR結(jié)果
　　5.1 PCR擴(kuò)增凝膠成像
　　利用q-PCR之前做RT-PCR，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)空白對(duì)照組與嗅覺剝奪組之間比較有差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.2δ亞基熒光定量PCR
　　實(shí)驗(yàn)過程中δ亞基與內(nèi)參GAPDH的實(shí)時(shí)熒光定量PCR融解曲線一般為單一峰，如果該P(yáng)CR融解曲

7、線表現(xiàn)為單一峰則表示二者均為特異性表達(dá)，且為擴(kuò)增曲線良好。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組患者的δ亞基熒光定量PCR結(jié)果:空白對(duì)照組與嗅覺剝奪組在δ亞基熒光定量PCR結(jié)果比較有差異，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.3α5亞基熒光定量PCR
　　研究發(fā)現(xiàn)α5亞基與內(nèi)參GAPDH的實(shí)時(shí)熒光定量PCR融解曲線為單一峰，實(shí)驗(yàn)過程中二者均為特異性表達(dá)，并且擴(kuò)增曲線良好。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組患者的α5亞基熒光定量PCR結(jié)果:空白對(duì)照組與嗅