rs16873739相關的UBE2H表達影響冠心病的易感性.pdf

1、[目的]：
　　1.研究7q32.2上index SNP rs11556924前后300.6kb區(qū)域與中國南方漢族人群冠心病的關聯(lián)分析。
　　2.通過關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)與中國南方漢族人群冠心病發(fā)病有關的易感基因。
　　3.探討與冠心病發(fā)病有關易感基因的功能及作用。
　　[方法]：
　　利用HapMap Project數(shù)據(jù)庫篩選出7q32.2 rs11556924前后300.6kb區(qū)域中MAF＞0.05的19個SN

2、Ps，在所選用人群Ⅰ及人群Ⅱ中進行基因分型，其中人群Ⅰ及人群Ⅱ均選自2011-2013年廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院心內(nèi)科住院病人及同期健康體檢者，均為我國廣東地區(qū)漢族人群。人群Ⅰ包括997例冠心病患者與941例非冠心病者，人群Ⅱ包括1056例冠心病者與1056例非冠心病者。將基因分型結果統(tǒng)計分析，精細定位到與冠心病發(fā)病的易感基因;通過eQTL實驗，檢驗目標位點的分型與目標基因表達之間的相關性;之后對該位點所在的基因進行表達譜的檢測，過表達及敲低

3、該基因，檢測參與冠心病發(fā)病的炎癥因子變化和大鼠球囊拉傷實驗檢測平滑肌的遷移情況，研究與冠心病發(fā)病相關目的基因的功能。
　　[結果]：
　　1.入選人群基本特征:入選人群根據(jù)年齡與性別進行匹配，匹配后可見甘油三酯TG，膽固醇TC差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），可能與冠心病病人使用了降脂藥物有關。傳統(tǒng)危險因素中冠心病組超重，吸煙，高血壓，糖尿病，高脂血癥的比例明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　2.關

4、聯(lián)分析:冠心病組與對照組相比，在白種人中發(fā)現(xiàn)的與冠心病相關的位點rs11556924，其等位基因頻率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;而TagSNPsrs16873739，rs1471876和rs2727507在合并人群中的等位基因頻率在差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);其中經(jīng)過Bonferroni多重校正后，只有rs16873739等位基因頻率差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3.Hardy-Weinberg equil

5、ibrium檢驗:將分型的SNP分別在人群Ⅰ及人群Ⅱ及合并人群的對照組中進行Hardy-Weinberg equilibrium檢驗，P值均大于0.05，說明群體基因遺傳平衡，來自同一孟德爾群體。
　　4.eQTL實驗:通過測序和Realtime PCR檢測目的基因UBE2H表達水平，攜帶rs16873739低頻率等位基因UBE2H基因表達水平較高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，進一步說明UBE2H是潛在的冠心病易感基因。

6、r>　　5.相關位點(rs16873739)所在的基因表達譜檢測:易感基因UBE2H在與冠心病發(fā)病相關的細胞中，包括血管內(nèi)皮細胞(HUVEC)，血管平滑肌細胞(HASMC)和血液中的單核細胞(THP-1)都能夠表達。
　　6.UBE2H基因與冠心病相關功能研究:siRNA敲低內(nèi)皮細胞中UBE2H基因的表達后，檢測內(nèi)皮細胞表達的黏附分子和趨化因子包括VCAM，CCL-2，E-seletion，IL-6，IL-8，ICAM，實驗組與N

7、C組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，即降低UBE2H可以顯著的降低內(nèi)皮細胞趨化因子及粘附因子的表達。
　　7.大鼠球囊拉傷實驗:過表達UBE2H的頸動脈平滑肌細胞在內(nèi)皮損傷后遷移和增殖程度非常明顯的高于過表達GFP組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，說明過表達UBE2H增加了內(nèi)皮損傷誘導的平滑肌細胞的遷移和增殖。
　　[結論]：
　　1.驗證了中國漢族人群與歐洲人群在7q32.2有著不同的冠心病易感位點，