KDR基因3個(gè)單核苷酸多態(tài)性與冠心病的遺傳易感性相關(guān).pdf

1、研究背景和目的：冠心病的發(fā)生是多種危險(xiǎn)因素長(zhǎng)期作用的結(jié)果所導(dǎo)致的。對(duì)冠心病的研究，是當(dāng)前心血管領(lǐng)域里研究的焦點(diǎn)。血管內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)幾乎貫穿于各個(gè)冠心病發(fā)病學(xué)說(shuō)之中，被廣泛認(rèn)為是冠心病發(fā)病進(jìn)程中最重要的始動(dòng)環(huán)節(jié)。人體內(nèi)多種因素均不可避免地造成內(nèi)皮細(xì)胞損傷。而人體內(nèi)存在的內(nèi)皮損傷后修復(fù)機(jī)制在防止各種危險(xiǎn)因素累積以及各種病理效應(yīng)疊加的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子及其受體系統(tǒng)在血管生成和內(nèi)皮損傷修復(fù)過(guò)程中至關(guān)重要。VEGF與受體

2、結(jié)合后，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂增殖，從而發(fā)揮VEGF的生物學(xué)活性。KDR是2型VEGF受體，主要表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞，介導(dǎo)VEGF的生物學(xué)效應(yīng)，在血管生成和修復(fù)中起了關(guān)鍵作用。VEGF及KDR在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中高表達(dá)，并與斑塊破裂有關(guān)，參與了冠狀動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程。已有數(shù)據(jù)庫(kù)顯示KDR基因含有多個(gè)SNP位點(diǎn)，生物信息學(xué)提示某些SNP位點(diǎn)可能影響蛋白分子VEGFR2的表達(dá)情況及功能。本研究中，我們推測(cè)KDR基因啟動(dòng)子區(qū)天然存在的多態(tài)性位點(diǎn)SNP

3、-604以及編碼區(qū)多態(tài)性位點(diǎn)SNPll92和SNPl719可能與冠心病的個(gè)體遺傳易感性有關(guān)。 研究方法：我們采用病例對(duì)照研究的方法分析了KDR基因-604SNP位點(diǎn)。其中包括兩個(gè)獨(dú)立的病例-對(duì)照人群：665例冠心病患者(191例急性冠脈綜合征和474例穩(wěn)定型冠心病)和1013例正常對(duì)照；369例冠心病患者和625例正常對(duì)照?；蚍中筒捎肞CR結(jié)合限制性?xún)?nèi)切酶消化的方法，并通過(guò)抽樣測(cè)序驗(yàn)證。同時(shí)我們通過(guò)熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)研究ELIS

4、A方法檢測(cè)血清VEGFR水平驗(yàn)證了啟動(dòng)子區(qū)SNP-604對(duì)啟動(dòng)子活性的影響，利用凝膠阻滯電泳分析(EMSA)證明了啟動(dòng)子區(qū)SNP-604位點(diǎn)附近序列與核蛋白(推測(cè)含一種以上轉(zhuǎn)錄因子)結(jié)合，另外我們構(gòu)建了編碼區(qū)SNP位點(diǎn)突變型和野生型載體，通過(guò)配體-受體結(jié)合試驗(yàn)證明了編碼區(qū)2個(gè)SNP位點(diǎn)影響VGEFR2與VEGF的結(jié)合效率。 研究結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示這3個(gè)SNP位點(diǎn)均與冠心病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，在第一個(gè)病例-對(duì)照人群中SNP-604的OR=1

5、.37(p=0.006)， SNP1192的OR=1.41(p=0.011)，SNP1719的OR=1.37(p=0.007)，在第二個(gè)病例-對(duì)照人群中SNP.604的OR=1.40(p=0.015)，SNP1192的OR=1.75(p=0.003)，SNPl719的OR=1.50(p=0.010)。此外，功能學(xué)研究顯示SNP-604降低了KDR基因啟動(dòng)子活性，其中等位基因?yàn)镃基因型的KDR啟動(dòng)子活性比T基因型低68％，同時(shí)ELISA結(jié)