贛南臍橙皮中橙皮苷的提取、純化及其活性研究.pdf

1、據(jù)目前研究,柑橘屬類黃酮的單體種類約有60余種,主要包括黃酮、黃酮醇、黃烷酮以及花青苷,以黃烷酮最為豐富,其中橙皮苷含量最多,而且表現(xiàn)出非常重要的生物活性價(jià)值。本課題選用具有江西地方特色的資源--贛南臍橙皮為原料,提取、純化臍橙皮中橙皮苷,并對其與DNA、IgG的相互作用進(jìn)行了研究。結(jié)果如下:
　　 1.在紫外-可見分光光度法(UV-vis)的基礎(chǔ)上,通過比較直接測定法、NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法、AlCl3法、醇

2、堿法,確定醇堿法測定臍橙皮中黃酮類化合物。同時(shí)通過比較UV-vis和高效液相色譜法(HPLC)測定粗品中橙皮苷的純度,得出UV-vis(67.25％)較HPLC法(61.42％)測得的純度高。為節(jié)約時(shí)間和成本,最終確定在提取及純化的條件優(yōu)化過程中用UV-vis法,HPLC的精確度更高,可用于樣品最終純度的測定。
　　 2.在單因素的基礎(chǔ)上用響應(yīng)曲面法對贛南臍橙皮中黃酮化合物的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明:
　　 水浴提取

3、贛南臍橙皮中黃酮化合物的最佳提取工藝為:提取溫度69.96℃,乙醇濃度(體積分?jǐn)?shù))50.46％,液固比25.91:1,提取時(shí)間3.04h,提取一次,預(yù)測可獲得黃酮化合物最大提取得率為2.97％,經(jīng)驗(yàn)證黃酮化合物平均得率與預(yù)測值較為接近。
　　 超聲輔助提取贛南臍橙皮中黃酮類化合物的最佳提取工藝為:提取溫度75℃、乙醇濃度58.91％、液固比30.68:1、提取時(shí)間20.79 min、提取次數(shù)為2次,預(yù)測可獲得最大黃酮類化合物得率

4、為3.298％。對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,在最佳實(shí)驗(yàn)條下做三次平行實(shí)驗(yàn),平均得率為3.351％,與理論值相差0.053％。
　　 通過比較水浴和超聲輔助提取黃酮類化合物,可見超聲輔助法優(yōu)于水浴提取。本實(shí)驗(yàn)選用超聲輔助提取。
　　 3.通過D101、AB-8、NKA-Ⅱ、NKA-9四種大孔吸附樹脂對橙皮苷靜態(tài)吸附和解吸性能的比較,確定采用D101大孔吸附樹脂純化黃酮類化合物(主要為橙皮苷)。其最佳工藝條件是:上樣濃度0.2mg/

5、mL,左右:上樣流速1mL/min；直接上樣；洗脫液乙醇濃度為60％;解吸流速為上樣流速1/2,即0.5mL/min；洗脫劑用量約為3BV。純化后樣品純度最高達(dá)可達(dá)94.82％,富集倍數(shù)最高可達(dá)1.54,橙皮苷回收率為70.27％。D101可用于臍橙皮中橙皮苷的純化。
　　 4.應(yīng)用熒光光譜、紫外-可見光譜技術(shù)研究了在生理酸度條件下(pH=7.40)橙皮苷與免疫球蛋白(IgG)相互作用。研究發(fā)現(xiàn),橙皮苷對IgG內(nèi)源性熒光產(chǎn)生了猝

6、滅作用,測定不同溫度下橙皮苷對IgG的猝滅常數(shù),得出橙皮苷對IgG的熒光猝滅為復(fù)合式猝滅方式；熱力學(xué)參數(shù)表明,二者結(jié)合的主要驅(qū)動力為疏水作用力；同步熒光和三維熒光圖譜表明橙皮苷能夠使IgG的構(gòu)象發(fā)生變化。
　　 5.采用紫外光譜法、熒光探針法、熔點(diǎn)實(shí)驗(yàn)及粘度實(shí)驗(yàn),研究了在生理酸度條件下(pH=7.40)橙皮苷與DNA的作用方式。結(jié)果表明橙皮苷與DNA主要發(fā)生了嵌插作用。橙皮苷對DNA-EB體系的熒光猝滅屬于靜態(tài)猝滅,求得298K