UC-MSC和ASC的生物學特性鑒別及對U251細胞的分化、凋亡的影響.pdf

1、本文主要分兩部分展開研究：
　　第一部分 UC-MSC和ASC的生物學特性鑒別
　　目的：比較人臍帶和脂肪來源的間充質(zhì)干細胞的生物學特性。
　　方法：分離及體外培養(yǎng)人脂肪和臍帶來源的間充質(zhì)干細胞。通過連續(xù)9天的CCK-8的檢測結(jié)果繪制兩種間充質(zhì)干細胞的生長曲線。為了解ASC和UC-MSC的免疫表型，流式細胞儀檢測CD13、CD14、CD44、CD45、CD71、CD90、CD105和CD34在兩種MSC上的表達。利用地

2、塞米松誘導ASC和UC-MSC后，流式檢測Annexin-V的表達，分析MSCs的抗凋亡能力。通過成脂、成骨、成神經(jīng)誘導培養(yǎng)基對兩種間充質(zhì)干細胞的誘導分化，鑒定其多向分化的潛能。分別采用油紅O、茜素紅、GFAP染色鑒定是否分化成功。通過蛋白芯片分析ASC和UC-MSC的培養(yǎng)液上清的分泌的蛋白和細胞因子。
　　結(jié)果：脂肪來源和臍帶來源的間充質(zhì)干細胞都能成功從相關(guān)組織中分離培養(yǎng)。ASC和UC-MSC形態(tài)上相似，2天左右時呈現(xiàn)纖維狀或梭

3、形，當6-10天后細胞密度增大時，呈現(xiàn)在平行排列生長或旋渦狀生長。ASC和UC-MSC均表達CD13、CD44、CD71、CD90、CD105，不表達CD14、CD34和CD45。生長曲線顯示12-18h，細胞增殖較慢，2d后進入對數(shù)生長期，持續(xù)5-6d，在7-8d后進入細胞生長平臺期。在高濃度的地塞米松的誘導下，ASC和 UC-MSC都具有良好的抗凋亡能力。脂肪來源和臍帶來源的間充質(zhì)干細胞都具有很好的成脂、成骨、成神經(jīng)元的誘導分化能力

4、。在培養(yǎng)過臍帶間充質(zhì)干細胞和脂肪間充質(zhì)干細胞的上清中，兩種干細胞所分泌的細胞因子水平不盡相同。UC-MSC上清中的MIP-2、IL-6和GRO的表達顯著高于ASC，而ASC上清中的CD27和神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白含量則高于UC-MSC。
　　結(jié)論：脂肪來源和臍帶來源的間充質(zhì)干細胞均具有類似的生物學特性，但在誘導分化、增殖能力方面各有優(yōu)勢，所分泌的細胞因子水平也不盡相同，因此應根據(jù)不同的需要選擇合適來源的干細胞。
　　第二部分 UC-M

5、SC和ASC條件培養(yǎng)基對U251細胞的分化、凋亡的影響
　　目的：了解兩種間充質(zhì)干細胞，ASC和UC-MSC的培養(yǎng)上清的抗膠質(zhì)瘤特性。
　　方法：通過CCK-8檢測UC-MSC和ASC的培養(yǎng)上清抑制U251的增殖能力。利用流式細胞儀檢測Annexin-V的表達分析UC-MSC和ASC的培養(yǎng)上清誘導U251后的凋亡程度。實時熒光定量PCR檢測U251在誘導前后的凋亡相關(guān)基因的mRNA的表達量。通過高通量篩選系統(tǒng)評估膠質(zhì)細胞在分

6、化后的形態(tài)改變。劃痕試驗、Matrigel侵襲試驗檢測腫瘤細胞的侵襲能力。通過蛋白芯片分析 U251細胞在ASC-CM和 UC-MSC-CM誘導前后蛋白表達。
　　結(jié)果：兩種類型的間充質(zhì)干細胞都能抑制U251細胞的增殖，特別是UC-MSC的抑制能力更強。Annxin-V和PI的凋亡檢測表明ASC-CM和UC-MSC-CM都能誘導U251細胞凋亡。實時熒光定量PCR檢測表明誘導后U251的凋亡基因Caspase-3和Caspase-