吳茱萸堿對人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖及凋亡影響的研究.pdf

1、膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的顱內(nèi)腫瘤,并且有著很高的致死率。與此同時,它有較高的侵襲性且不易于治療。對膠質(zhì)瘤的各種臨床治療僅僅只能延長患者幾個月的生存期,預(yù)后極其不佳。因此,發(fā)掘一個新的抗癌藥物對于膠質(zhì)瘤的治療至關(guān)重要。傳統(tǒng)中藥用于治療腫瘤已有很長一段時間,大量研究表明許多中藥的提取物或者他們的混合物在體內(nèi)外都有抗癌作用。吳茱萸堿是從吳茱萸的中提取的主要生物堿,它具有抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)特性。然而吳茱萸堿對膠質(zhì)瘤的作用及其作

2、用機制均不明確。
　　目的：研究吳茱萸堿(Evodiamine)對人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其可能的作用機制。
　　方法：體外培養(yǎng)人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞,并將其分為空白對照組及25、50、100μg.mL-1吳茱萸堿4組。應(yīng)用MTT法檢測吳茱萸堿在24、48和72h對U251細(xì)胞的增殖抑制作用;Hoechst33258熒光染色法檢測吳茱萸堿誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞凋亡;采用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測

3、各組24h細(xì)胞早期凋亡率;Western blot法分析凋亡相關(guān)蛋白的變化。
　　結(jié)果:與空白對照組同期比較,25、50、100μg.mL-1吳茱萸堿組生長抑制率在24、48、72h均增加,隨著吳茱萸堿濃度增加和作用時間延長,細(xì)胞增殖抑制越明顯,其抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性和時間依賴性,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Hoechst33258熒光染色顯示吳茱萸堿作用24 h后U251細(xì)胞出現(xiàn)典型的細(xì)胞凋亡特征,各處理組均可見凋亡小體

4、。U251細(xì)胞凋亡小體數(shù)量隨著吳茱萸堿濃度的增加而逐漸增多,且碎裂的顆粒逐漸變小。隨著吳茱萸堿濃度增加和作用時間延長,細(xì)胞的凋亡率逐漸升高。與空白對照組自發(fā)早期凋亡率3.12％比較,25、50、100μg.mL-1吳茱萸堿組早期凋亡率分別為8.65％、19.47％及28.97％,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Western blot實驗顯示,與空白對照組同期比較,25、50、100μg.mL-1吳茱萸堿上調(diào)了Fas、FADD、Ca