膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞來(lái)源的exosome對(duì)自身細(xì)胞增殖和遷移的影響.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)嘗試從膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞培養(yǎng)上清液中進(jìn)行exosome的提取，進(jìn)一步研究exosome對(duì)自身細(xì)胞增殖、遷移能力的影響，并探討可能相關(guān)機(jī)制,為以exosome為突破口的腦膠質(zhì)瘤生物靶向治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　方法:體外培養(yǎng)U251細(xì)胞，差速離心法自無(wú)血清U251細(xì)胞培養(yǎng)上清液中提取exosome，以液相載網(wǎng)法在透射電鏡下觀察exosome的存在與否及其形態(tài)、大小等特點(diǎn)。以0、5、10、20、40ug/ml的ex

2、osome終濃度及24、48、72h的不同時(shí)間刺激U251細(xì)胞， CCK-8法檢測(cè)exosome對(duì)U251細(xì)胞增殖的影響。以0、40、80ug/ml的exosome終濃度及12、24h的不同時(shí)間刺激U251細(xì)胞，劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)exosome對(duì)U251細(xì)胞遷移能力的影響。以0、50、100ug/ml的exosome終濃度及12、24h的不同時(shí)間刺激U251細(xì)胞，transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)exosome對(duì)U251細(xì)胞遷移能力的影響。

3、>　　結(jié)果：透射電鏡下可觀察到一種微小囊泡，呈圓形、橢圓形，形態(tài)一致，部分呈特征性盤狀結(jié)構(gòu)，由雙層膜構(gòu)成，直徑在30-100nm之間，因此確定其為本次提取目標(biāo)物質(zhì)-exosome。CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果：橫向比較：24h，增值率隨exosome濃度遞增而逐漸增高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）；48h，增值率隨exosome濃度遞增而逐漸增高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05/0.01）；72h，增值率隨exosome濃度遞增而逐漸增高，且有統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)差異（P＜0.05，/0.01）。縱向比較：5ug/ml組中，增值率隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P≤0.01)；10ug/ml組中，增值率隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，（P＜0.05/0.01）；20ug/ml和40ug/ml組中，增值率均隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果：12h和24h，對(duì)照組、40u/ml組、80ug/ml組之間U251細(xì)胞遷移距離均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，（P＞0.05

5、）。transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果：12h和24h，對(duì)照組、50ug/ml組、100ug/ml組之間U251細(xì)胞穿過(guò)小室底部數(shù)量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，（P＞0.05）。
　　結(jié)論：U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞可分泌exosome，其特征與以往報(bào)道其他腫瘤細(xì)胞來(lái)源exosome基本一致；U251細(xì)胞來(lái)源的exosome以濃度、時(shí)間依賴方式促進(jìn)自身細(xì)胞增殖，其增殖機(jī)制可能與PI3K/Akt通路、MAPK/ERK通路有關(guān)，但不參與介導(dǎo)U251細(xì)胞遷移，對(duì)自