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文檔簡介
1、目的:分離并培養(yǎng)6例患者的瘢痕疙瘩成纖維細胞,取培養(yǎng)6代的細胞進行實驗.①構(gòu)建p53腺病毒載體系統(tǒng).②檢測他莫昔芬和攜帶p53基因片段的重組腺病毒轉(zhuǎn)染單獨應(yīng)用及聯(lián)合應(yīng)用后,瘢痕疙瘩成纖維細胞P53蛋白和p53基因表達的改變及其變化規(guī)律,以及相應(yīng)的細胞周期變化.③觀察瘢痕疙瘩成纖維細胞P53蛋白和p53基因表達的改變與細胞周期變化之間的對應(yīng)關(guān)系.④觀察聯(lián)合應(yīng)用他莫昔芬和攜帶p53基因片段的重組腺病毒轉(zhuǎn)染對細胞生長的抑制是否具有協(xié)同作用.方
2、法:①構(gòu)建腺病毒載體系統(tǒng)并轉(zhuǎn)染瘢痕疙瘩成纖維細胞.②瘢痕疙瘩成纖維細胞分為四組,他莫昔芬和攜帶p53基因片段的重組腺病毒轉(zhuǎn)染單獨及聯(lián)合應(yīng)用后,分別應(yīng)用RT-PCR以及Western Blot方法檢測瘢痕疙瘩成纖維細胞P53蛋白和p基因表達的變化,以單純瘢痕疙瘩成纖維細胞做對照.③流式細胞儀檢測各組細胞細胞周期的變化.結(jié)論:他莫昔芬和攜帶p53基因片段的重組腺病毒轉(zhuǎn)染均可使瘢痕疙瘩成纖維細胞的P53蛋白和p53基因表達顯著增加,導(dǎo)致瘢痕疙
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