尿酸調(diào)節(jié)Akt-GSK3β信號通路發(fā)揮對6-OHDA誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、第一部分:尿酸對6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷的保護(hù)作用
　　目的：評價尿酸對6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷的作用。
　　方法：采用SH-SY5Y細(xì)胞制作6-OHDA損傷的帕金森病細(xì)胞模型，分為對照（DMEM）組、6-OHDA（50μmol.L-1）組、尿酸組（200μmol.L-1）以及6-OHDA（50μmol.L-1）+尿酸組（25、50、100、200、400μmol.L-1)。預(yù)給尿酸0.5h后

2、，6-OHDA作用6h、12h后分別以比色法檢測細(xì)胞外乳酸脫氫酶（LDH）含量和MTT比色法檢測細(xì)胞活性，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化；6-OHDA作用14h后采用比色法檢測細(xì)胞內(nèi)還原性谷胱甘肽（GSH）含量的變化。
　　結(jié)果：50μmol.L-16-OHDA對 SH-SY5Y細(xì)胞作用6h，LDH釋放顯著增加（203.58±32.47%vs99.99±0.01%，P<0.01）；12h，細(xì)胞活性顯著下降(51.68±9.02%vs

3、100±3.56%，P<0.001)，細(xì)胞密度明顯減少，細(xì)胞突起明顯縮短，少數(shù)細(xì)胞皺縮成圓形，細(xì)胞間連接明顯減少；200μmol.L-1尿酸對50μmol.L-16-OHDA作用6h時LDH釋放增加有顯著的減輕（133.63±11.35% vs203.58±32.47%，P<0.05），200和400μmol.L-1尿酸對6-OHDA作用12h時 SH-SY5Y細(xì)胞活性下降有顯著的改善（82.61±7.18% vs51.68±9.02%

4、、91.55±7.16%vs51.68±9.02%，P<0.01， P<0.01）；200μmol.L-1尿酸對6-OHDA作用12h的細(xì)胞形態(tài)變化有所改善，相比細(xì)胞密度較大、變圓細(xì)胞較少，細(xì)胞較飽滿，細(xì)胞突起顯著增長；50μmol.L-16-OHDA對 SH-SY5Y細(xì)胞作用14h時后，GSH含量顯著下降（4.13±0.42μmol.L-1 vs7.40±0.86μmol.L-1， P<0.05），200μmol.L-1尿酸對6-OH

5、DA作用14h時GSH含量下降有顯著的改善（9.43±0.82μmol.L-1 vs4.13±0.42μmol.L-1，P<0.001）。
　　結(jié)論：尿酸對6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。
　　第二部分:尿酸對Akt/GSK3β信號通路的調(diào)節(jié)
　　目的：探討尿酸對Akt/GSK3β信號通路的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：采用 SH-SY5Y細(xì)胞制作6-OHDA損傷的帕金森病細(xì)胞模型，分為對照（DME

6、M）組、6-OHDA（50μmol.L-1）組、尿酸組（200μmol.L-1）以及6-OHDA（50μmol.L-1）+尿酸（25、50、100、200、400μmol.L-1)組，其中每組又分為LY294002（0μmol.L-1）和LY294002（5μmol.L-1）亞組；預(yù)先給予尿酸0.5h后，6-OHDA再作用4h、12h后，分別用Western blot法測定不同組別SH-SY5Y細(xì)胞Akt ser473位點(diǎn)和GSK3βs

7、er9位點(diǎn)磷酸化水平變化以及MTT比色法檢測細(xì)胞活性。
　　結(jié)果：50μmol.L-16-OHDA作用于SH-SY5Y細(xì)胞4h后，與對照組相比，Akt ser473活化明顯受抑制，即 Akt ser473位點(diǎn)的磷酸化水平下降（58.01±8.16% vs100.33±2.52%，P<0.01）；GSK3βser9失活明顯受抑制，即GSK3βser9位點(diǎn)的磷酸化水平下降（40.67±23.33% vs99.67±5.51%，P<0.

8、05）；而尿酸（200-400μmol.L-1）+6-OHDA組與6-OHDA組相比，Akt ser473位點(diǎn)的磷酸化水平和GSK3β ser9位點(diǎn)的磷酸化水平升高（84.81±5.62%、105.13±19.16%vs58.01±8.16%；122.89±38.28、150.41±63.46%vs40.67±23.33%，P<0.05, P<0.001，P<0.05，P<0.01），而尿酸+6-OHDA+LY組與尿酸+6-OHDA組相

9、比， GSK3β ser9位點(diǎn)的磷酸化水平下降（55.68±39.46% vs115.89±40.49%， P<0.05）。50μmol.L-16-OHDA作用于SH-SY5Y細(xì)胞12h后，與對照組相比降低細(xì)胞的活性（58.94±5.16%vs100±5.26%，P<0.001），尿酸+6-OHDA組對 SH-SY5Y細(xì)胞活性下降有顯著的提高（102.58±6.96%vs58.94±5.16%，P<0.001），而尿酸+6-OHDA+L