MLK3-MKK3-6-P38信號(hào)通路在β-淀粉樣肽誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡中的作用與調(diào)控.pdf

1、目的:研究表明，β-淀粉樣肽(Aβ)在阿爾茨海默病(AD)的發(fā)病中起著至關(guān)重要的引發(fā)及樞紐作用，但Aβ神經(jīng)毒性的分子機(jī)制迄今尚不明確。本實(shí)驗(yàn)研究Aβ作用后MLK3、MKK3/6和P38MAPKs的活性(磷酸化)變化，并分析P38MAPKs及MLK3的抑制劑SB239063(SB)、K252a對(duì)Aβ誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響，以闡明MLK3-MKK3/6-P38信號(hào)通路在Aβ神經(jīng)毒性中的作用；分別觀察N-甲基-D-天(門)冬氨酸(NMDA)受體

2、拮抗劑MK801及NMDA受體亞基NR2A、NR2B的抑制劑NVP-AAM077(NVP)和R025-6981(Ro)對(duì)Aβ作用下MLK3-MKK3/6-P38信號(hào)通路的活化、細(xì)胞凋亡的影響，以闡明Aβ神經(jīng)毒性條件下MLK3-MKK3/6-P38信號(hào)通路調(diào)控的分子機(jī)制，最終為AD治療藥物的開(kāi)發(fā)提供新的線索。 方法:采用神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y，寡聚化的Aβ25-35加入培養(yǎng)基中作用不同時(shí)間；用DAPI染色法觀察細(xì)胞凋亡情況

3、；用免疫印跡方法檢測(cè)MLK3、MKK3/6和P38MAPKs的磷酸化水平改變。所有工具藥均在Aβ作用前半小時(shí)加入無(wú)血清含N2的培養(yǎng)基。 結(jié)果: 1、DAPI染色結(jié)果顯示，Aβ25-35刺激后1h，SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡率有顯著升高，并隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高，有時(shí)間依賴性。 2、Aβ25-35引起細(xì)胞內(nèi)MLK3、MKK3/6和P38MAPKs磷酸化水平的升高，均在Aβ25-35作用6h時(shí)達(dá)到活化高峰。

4、3、P38MAPKs抑制劑SB作用于細(xì)胞后，P38MAPKs磷酸化水平降低而MLK3和MKK3/6磷酸化水平無(wú)明顯變化，DAPI染色結(jié)果顯示細(xì)胞凋亡率明顯下降。 4、MLK3抑制劑K252a作用于細(xì)胞后，MLK3、MKK3/6和P38MAPKs的磷酸化水平均下降而且細(xì)胞凋亡率降低。 5、NMDA受體拮抗劑MK801及NR2A、NR2B的抑制劑NVP和Ro分別作用于細(xì)胞，結(jié)果顯示MLK3、MKK3/6和P38MAPKs的磷