Calpain在異氟烷對(duì)大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖與分化影響中的作用.pdf

1、【目的】研究異氟烷對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）增殖與分化的毒性作用，探討Calpain及其下游相關(guān)信號(hào)通路在異氟烷對(duì)NSCs影響中的作用，為預(yù)防和治療全身麻醉藥對(duì)發(fā)育期大腦神經(jīng)毒性作用提供一定理論依據(jù)。
　　【方法】
　　1.原代提取和培養(yǎng)SD大鼠新生鼠（出生1 d內(nèi)）海馬NSCs，取傳代至第2代細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。
　　2. NSCs誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，取傳代NSCs置于誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，7～9d分化完成。
　　3.實(shí)

2、驗(yàn)分組及藥物處理，實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為4組（n=5），包括空白對(duì)照組（CON control）：給予含有21％O2和5%CO2的混合氣體，處理6h；異氟烷組（ISO）：給予3.4％異氟烷，處理6h；calpeptin組(CP)：于麻醉前30分鐘于培養(yǎng)基中加入10μM calpeptin，并給予含有21％O2和5%CO2的混合氣體，處理6h；異氟烷+calpeptin組(ISO+CP)：于麻醉前30分鐘于培養(yǎng)基中加入10μM calpeptin，

3、給予3.4%異氟烷，處理6h。
　　4.乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒檢測(cè)NSCs乳酸釋放量。
　　5. TUNEL試劑盒檢測(cè)NSCs凋亡。
　　6. BrdU檢測(cè)NSCs增殖。
　　7. Western blot檢測(cè)GFAP、Tuj-1、αII-spectrin及其裂解產(chǎn)物SBDP145、CDK5、p35、p25蛋白水平變化。
　　【結(jié)果】
　　1. NSCs呈懸浮生長(zhǎng)，約3d左右形成神經(jīng)球，傳代后行免

4、疫熒光化學(xué)染色檢測(cè)NSCs標(biāo)志物nestin，第二代NSCs陽(yáng)性率為（94.24±3.99）%。
　　2.與CON組相比，ISO組LDH釋放量在麻醉后0h、12h、24h都增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而ISO組在麻醉后各時(shí)間點(diǎn)的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目并不顯著增多。
　　3.與CON組相比較，ISO組在麻醉后0h、12h、24h時(shí)BrdU標(biāo)記的NSCs的數(shù)目明顯減少。
　　4.與CON組相比較，ISO組在麻醉后0h和12h，

5、SBDP145水平明顯升高（P<0.01)，24h時(shí)無(wú)明顯改變。
　　5.與CON組相比較，CP組SBPD145水平降低，與ISO組相比，ISO+CP組SBPD145水平明顯下降。
　　6.與CON組相比，ISO組BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目顯著減少，而CP組無(wú)明顯差異；與ISO組相比，ISO+CP組BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增加。
　　7.與CON組相比，ISO組GFAP水平升高，Tuj-1水平無(wú)明顯改變；CP組GFAP水平無(wú)明顯

6、改變，而Tuj-1水平升高。與ISO組相比較，ISO+CP組GFAP水平降低，Tuj-1水平無(wú)明顯改變。
　　8.與CON組相比，ISO組在麻醉后0h、12h、24h CDK5和p25表達(dá)水平增高，而p35水平下降，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與CON組相比，CP組p35表達(dá)水平增高，而p25、CDK5表達(dá)水平無(wú)明顯變化；與ISO組相比，ISO+CP組p35表達(dá)水平增高而p25、CDK5表達(dá)水平降低。
　　【結(jié)論】異氟烷可導(dǎo)致NS