腦脊液對神經(jīng)干細胞增殖分化影響的實驗研究.pdf

1、第一章新生大鼠腦和脊髓神經(jīng)干細胞的分離培養(yǎng)和鑒定。 目的：研究新生鼠脊髓源性神經(jīng)干細胞(neural stem cells，NSCs)和腦源性神經(jīng)干細胞在形態(tài)學及增殖能力等方面的異同，為神經(jīng)干細胞的移植應(yīng)用打下基礎(chǔ)。 方法：從新生24小時的SD大鼠脊髓和腦組織中分離培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，用無血清培養(yǎng)技術(shù)在體外進行培養(yǎng)、擴增、傳代，去除生長因子后在含血清培養(yǎng)基中誘導(dǎo)分化，在相差顯微鏡下動態(tài)觀察兩種不同來源的神經(jīng)干細胞的生長情況及

2、增殖分化方面的異同，通過免疫熒光技術(shù)鑒定神經(jīng)干細胞及其分化細胞。 結(jié)果：脊髓源性和腦源性神經(jīng)干細胞具有相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，均可自我更新和增殖。但腦來源的神經(jīng)球數(shù)量和每個神經(jīng)球所含細胞數(shù)均多于脊髓，腦源性神經(jīng)干細胞增殖速度明顯更快，兩種來源的大部分原代和傳代神經(jīng)球均表達神經(jīng)干細胞特異性抗原Nestin陽性，可分化為三種神經(jīng)細胞，表達神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞的特異性抗原NSE、GFAP，反復(fù)傳代后這些細胞可保持自我增殖能力及多向分化潛能。

3、 結(jié)論： 1．從新生鼠的脊髓和腦組織中均可分離培養(yǎng)出神經(jīng)干細胞，都具有自我更新和增殖能力，并具有多向分化潛能。 2．相同培養(yǎng)條件下，腦源性神經(jīng)干細胞的數(shù)量多，增殖能力強于脊髓源神經(jīng)干細胞，二者在體外都能大量擴增。 第二章腦脊液對神經(jīng)干細胞增殖分化的影響。 目的：研究腦外傷血性腦脊液和腦積水清亮腦脊液對神經(jīng)干細胞增殖分化的影響。 方法：從新生24小時的SD大鼠腦組織中分離培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，經(jīng)傳代

4、后，分別用人的腦外傷血性腦脊液和腦積水清亮腦脊液培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，模擬不同時期神經(jīng)干細胞經(jīng)腦脊液移植后在腦脊液中的生長情況，并分為試驗組(血性腦脊液組)和對照組(腦積水清亮腦脊液組)，分別于不同時間觀察神經(jīng)干細胞在兩組腦脊液中的生長及增殖分化情況，并應(yīng)用免疫細胞化學技術(shù)對兩組腦脊液中神經(jīng)干細胞的分化進行鑒定和比較。 結(jié)果：神經(jīng)干細胞在兩種腦脊液中均能存活，部分細胞呈懸浮生長，大部分細胞貼壁分化。同對照組相比，血性腦脊液組中神經(jīng)球貼

5、壁分化的比例高，速度快，分化更徹底。免疫細胞化學檢測顯示，兩組腦脊液中分化的細胞均表達神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞的特異性抗原NSE、GFAP。分化第2天試驗組NSE陽性細胞的比例比對照組高，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；分化第10天試驗組GFAP陽性細胞的比例比對照組高，NSE陽性細胞的比例比對照組低，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結(jié)論： 1．神經(jīng)干細胞能在腦外傷血性腦脊液和腦積水清亮腦脊液中均能存活、增殖和分化。