不同濃度異氟醚麻醉對(duì)發(fā)育期大鼠海馬P-GSK-3β-β-catenin表達(dá)及神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、研究背景:
　　吸入麻醉藥具有一定的鎮(zhèn)痛作用，并因其可控性好、血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)在兒科手術(shù)中得到廣泛應(yīng)用。而目前所有的吸入麻醉藥物中異氟醚的應(yīng)用最為廣泛。大量臨床回顧性研究表明，三歲之前的有過異氟醚暴露史的患兒在成年以后更容易發(fā)生學(xué)習(xí)障礙。神經(jīng)生物學(xué)研究表明，空間學(xué)習(xí)和記憶過程的形成主要依靠出生后海馬齒狀回部位的正常神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生。近年來關(guān)于對(duì)嚙齒動(dòng)物的研究顯示，異氟醚對(duì)處于發(fā)育期大腦的海馬具有一定的神經(jīng)毒性作用。這些作用包括能夠

2、抑制神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，引起神經(jīng)元退行性變以及與海馬相關(guān)的空間學(xué)習(xí)和記憶能力損害，但其機(jī)制尚不明確。
　　調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的重要通路即經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路，在維持神經(jīng)元細(xì)胞的正常功能、調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞的增殖并且協(xié)調(diào)細(xì)胞遷移等方面起到了重要作用。Wnt信號(hào)通路中的兩個(gè)關(guān)鍵因子包括磷酸化的糖原合成酶激酶(P-GSK-3β)和β-連環(huán)素(β-catenin)，其表達(dá)水平或者活性的變化均會(huì)影響Wnt目的基因的表達(dá)，進(jìn)而影響神經(jīng)干細(xì)胞的

3、正常功能。有研究表明P-GSK-3β表達(dá)水平的下降與靜脈麻醉藥氯胺酮引起的發(fā)育期神經(jīng)毒性有關(guān)，而P-GSK-3β和β-catenin是否在異氟醚的發(fā)育期神經(jīng)毒性中發(fā)揮作用尚無明確研究。
　　研究目的:
　　1、探討吸入不同濃度的異氟醚對(duì)發(fā)育期SD大鼠海馬細(xì)胞中的P-GSK-3β/β-catenin表達(dá)的影響。
　　2、探討吸入不同濃度的異氟醚對(duì)發(fā)育期SD大鼠海馬齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響。
　　研究方法:選取出生

4、后7天、體重15～20g的SD大鼠48只隨機(jī)分為4組(n=12):模擬麻醉組（C組）、0.5％異氟醚組（I0.5組）、1％異氟醚組（I1組）、1.5％異氟醚組(I1.5組)。C組吸入30％氧氣4h，I0.5、I1、I1.5組在與C組相同吸氧條件下分別吸入0.5％、1％、1.5％濃度的異氟醚4h。其中，從各實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)選取6只大鼠于麻醉開始前即刻腹腔注射5-溴脫氧尿苷(BrdU)200mg/kg，用以檢測海馬齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞的增殖情況。于麻

5、醉結(jié)束后6h處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物并分離海馬組織，采用免疫組織化學(xué)法檢測海馬齒狀回BrdU陽性細(xì)胞數(shù)的變化，采用Western blot法檢測海馬β-catenin、P-GSK-3β蛋白表達(dá)量的變化。
　　研究結(jié)果:
　　1、Western blotting檢測β-catenin、P-GSK-3β表達(dá)與C組相比，I0.5組大鼠海馬β-catenin、P-GSK-3β表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);I1組、I1.5組大鼠海馬β-c

6、atenin、P-GSK-3β表達(dá)下調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2、新生大鼠海馬齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞增殖情況 SD大鼠海馬的神經(jīng)干細(xì)胞主要集中于齒狀回的門區(qū)和顆粒細(xì)胞下區(qū)，對(duì)這兩個(gè)區(qū)域的BrdU陽性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。與C組相比，I0.5組大鼠海馬齒狀回BrdU陽性細(xì)胞數(shù)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，I1組、I1.5組大鼠海馬齒狀回BrdU陽性細(xì)胞數(shù)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:我們通過