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文檔簡介
1、該研究以CML細胞Ras-MAPK信號轉(zhuǎn)導通路中的MAPK為靶點,應用反義技術,以陽離子脂質(zhì)體作為轉(zhuǎn)染載體,設計并合成了與mapk mRNA翻譯起始部位的17個堿基序列互補的反義寡核苷酸(mapk ASO),聯(lián)合bcr/abl反義寡核苷酸(bcr/abl ASO)作用于CML細胞系K562和體外培養(yǎng)的原代CML骨髓細胞,通過封閉bcr/abl和mapk基因的表達以在不同環(huán)節(jié)作用于CML細胞,借助MTT、<'3>H-TdR摻入、集落形成、
2、蛋白合成、γ-<'32>P摻入、免疫印跡、RT-PCR、電鏡、流式細胞儀、片段DNA含量檢測和DNA梯狀電泳等試驗和手段,從不同角度,采用多項指標,在細胞,蛋白及分子水平上系統(tǒng)探討了MAPK在CML發(fā)病中的作用、作用機理及其與bcr/abl融合基因的關系.該研究證實,mapk基因反義寡核苷酸通過抑制MAPK活性、MAPK蛋白表達和含量而誘導CML細胞凋亡,逆轉(zhuǎn)其惡性表型;mapk基因反義寡核苷酸對bcr/abl融合基因表達無明顯影響,b
3、cr/abl基因反義寡核苷酸通過封閉bcr/abl融合基因表達而抑制MAPK活性、MAPK蛋白表達和含量,進而誘導CML細胞凋亡,逆轉(zhuǎn)細胞惡性表型;mapk基因反義寡核苷酸和bcr/abl基因反義寡核苷酸聯(lián)合作用具有協(xié)同效應;MAPK的激活是CML發(fā)病、發(fā)展的關鍵環(huán)節(jié)之一,Ras-MAPK信號轉(zhuǎn)導途徑通過介導凋亡抑制信號而在CML的發(fā)病中起重要作用,MAPK可作為CML治療的新靶點.探索出一種治療CML的全新模式:采用"反義"策略抑制基
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