骨髓間充質(zhì)干細胞對脊髓損傷后膠質(zhì)瘢痕影響的實驗研究.pdf

1、目的：構(gòu)建TGF-β1誘導星形膠質(zhì)細胞（Astrocyte，AS）體外模擬神經(jīng)損傷模型及SD大鼠T10脊髓鉗夾損傷模型。通過BMSCs體外共培養(yǎng)、體內(nèi)移植兩種方式，探索BMSCs對脊髓損傷后膠質(zhì)瘢痕形成的影響。
　　 方法：（1）全骨髓差速貼壁生長分離法將SD大鼠雙后肢股骨、脛骨骨髓內(nèi)的BMSCs進行分離培養(yǎng)。顯微鏡下觀察細胞生長性狀；流式細胞儀檢測其細胞表面標志物CD29、CD34、CD45和CD90的表達；同時通過誘導成骨、

2、成脂肪、成神經(jīng)分化來鑒定BMSCs。細胞差速貼壁法將出生1～3天SD大鼠腦組織中的AS進行分離培養(yǎng)。顯微鏡下觀察細胞各個階段生長性狀；應用GFAP-FITC細胞免疫熒光法對其進行鑒定。（2）構(gòu)建TGF-β1誘導AS體外模擬神經(jīng)損傷模型，通過觀察細胞形態(tài)的變化及誘導后AS的膠質(zhì)化水平，對AS損傷模型進行評估。構(gòu)建SD大鼠T10脊髓鉗夾損傷模型，造模后通過運動功能評價及組織病理學檢測，對脊髓損傷模型進行評估。（3）體外將TGF-β1誘導的A

3、S與BMSCs共培養(yǎng)12h，Western Blot檢測各實驗組CSPGs表達水平。造模后1周對隨機分組的SD大鼠局部移植BMSCs，在隨后的1～4周內(nèi)進行運動功能評價及Western Blot檢測CSPGs的表達水平。
　　 結(jié)果：（1）通過全骨髓差速貼壁分離培養(yǎng)的BMSCs增殖速度快，擴增能力強，傳代培養(yǎng)3代后細胞可獲較高純度。通過差速貼壁法培養(yǎng)的AS增殖速度快，經(jīng)震蕩及傳代培養(yǎng)后細胞純度高，經(jīng)GFAP-FITC細胞免疫熒光

4、檢測純度達97.4％滿足實驗的要求。（2）體外AS神經(jīng)損傷模型建立成功后，AS形態(tài)發(fā)生改變，膠質(zhì)化水平增高。造模后，大鼠出現(xiàn)明顯截癱(BBB<4分)，病理檢測脊髓正常結(jié)構(gòu)破壞等。（3）體外共培養(yǎng)12h后Western-Blot檢測各組細胞CSPGs表達。共培養(yǎng)組CSPGs表達較非共培養(yǎng)組明顯降低（P<0.05）。體內(nèi)移植后1-4周，治療組與手術(shù)對照組大鼠下肢神經(jīng)功能均有一定恢復，但是B組較A組大鼠恢復好，兩組大鼠BBB評分B組較A組顯著