內(nèi)皮祖細(xì)胞脊髓內(nèi)移植對(duì)脊髓損傷后神經(jīng)保護(hù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探索脊髓損傷后內(nèi)皮祖細(xì)胞的脊髓內(nèi)移植是否為脊髓的恢復(fù)提供神經(jīng)保護(hù)作用，為內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療脊髓損傷的研究提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：從80-100 g SD大鼠雙后肢提取骨髓經(jīng)梯度密度離心后，經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)兩周后用細(xì)胞形態(tài)學(xué)和細(xì)胞功能學(xué)鑒定為內(nèi)皮祖細(xì)胞（Endothelial progenitor cells, EPCs），用CM-Dil染料標(biāo)記后制成濃度為1×105個(gè)/ml細(xì)胞懸液備用。用改良Allen法在成年SD大鼠上制

2、造脊髓損傷模型，并立即在損傷部位硬膜下注射EPCs懸液，同時(shí)注射EPCs培養(yǎng)基作為對(duì)照。對(duì)所有大鼠脊髓損傷模型分別在損傷后1、2、3、4、5、6w評(píng)估大鼠后肢功能運(yùn)動(dòng)評(píng)分（BBB score）。分別在1w和2w末取出脊髓，直接在熒光顯微鏡下觀(guān)察CM-Dil標(biāo)記細(xì)胞位置。用WB測(cè)量脊髓損傷部位 VEGF蛋白表達(dá)量，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)局部血管數(shù)量及血管新生程度、凋亡細(xì)胞比例。脊髓損傷6w末用免疫組化方法檢測(cè)局部神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量、H

3、E染色橫斷面觀(guān)察脊髓損傷情況。
　　結(jié)果：（1）脊髓損傷后硬膜下移植 EPCs后，EPCs在局部損傷部位可以存活，并且可以遷移到脊髓實(shí)質(zhì)。（2）脊髓損傷1w、2w后EPCs移植組VEGF蛋白表達(dá)量明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。在2w末EPCs移植后脊髓局部?jī)?nèi)皮細(xì)胞數(shù)目比例（38.32±1.49%vs19.02±0.47%，P<0.05）和新生血管（16.12±0.79%versus7.61±0.63%，P<0.05）較對(duì)照組較多

4、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（3）手術(shù)2w后實(shí)驗(yàn)組大鼠局部脊髓凋亡細(xì)胞數(shù)量比例明顯少于對(duì)照組（38.50±5.01%vs18.67±1.86%，P<0.05）。（4）脊髓損傷6w后EPCs移植大鼠損傷部位神經(jīng)元數(shù)量比例（32.04±3.33%vs19.34±2.70%，P<0.05）明顯多于對(duì)照組大鼠，HE染色觀(guān)察實(shí)驗(yàn)組組織空洞面積小于對(duì)照組（27±4.59% vs59±3.27%，P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（5）。隨著