慢性氟中毒大鼠肝組織及人肝細(xì)胞HL-7702中TRPC5、TRPC6表達(dá)意義的研究.pdf

1、目的: 通過研究慢性氟中毒大鼠肝組織及及人肝細(xì)胞HL-7702 TRPC5、TRPC6蛋白及其mRNA表達(dá)，初步探討TRPC5、TRPC6蛋白在氟中毒肝損傷機(jī)制中的作用，為地方性氟中毒肝損傷的診斷、預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。
　　方法: 36只SD大鼠隨機(jī)分為3組，每組12只，組內(nèi)雌雄各半。對(duì)照組飲用自來水（含氟F﹣＜0.5 mg／L），低氟組、高氟組分別飲用加氟5mg/L、50 mg/L的自來水。實(shí)驗(yàn)9個(gè)月后采用氟離子選擇電極法檢

2、測(cè)大鼠尿氟、骨氟含量，股動(dòng)脈放血處死大鼠并取肝組織-80℃保存；培養(yǎng)人HL-7702肝細(xì)胞株，分為對(duì)照組、低氟組、高氟組三組，接種到6孔板長滿后，對(duì)照組加入普通培養(yǎng)基，低氟、高氟組分別加入含F(xiàn)﹣0.5，5.0 mmol/L的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，于12h、24h、48h分別收集細(xì)胞。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法測(cè)定大鼠肝組織和人細(xì)胞中TRPC5、TRPC6 mRNA表達(dá)水平；Western Bolt方法測(cè)定肝組織、細(xì)胞TRPC5、TRPC6蛋白

3、表達(dá)，分析TRPC5、TRPC6在對(duì)照組與相應(yīng)氟中毒大鼠肝組織及人肝細(xì)胞中的表達(dá)及過量氟對(duì)肝臟病變的影響。
　　結(jié)果: （1）實(shí)驗(yàn)組大鼠出現(xiàn)不同程度的氟斑牙，且髙氟組重于低氟組；染氟組大鼠尿氟含量高氟組明顯高于低氟組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但低氟組與對(duì)照組無明顯差異(P>0.05)。骨氟含量低氟組、高氟組與對(duì)照組有明顯差異(P＜0.05)，但低氟組與高氟組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(2)實(shí)時(shí)熒光定量PCR

4、結(jié)果顯示氟中毒組大鼠肝組織TRPC5、TRPC6 mRNA表達(dá)明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且隨染氟濃度增加，表達(dá)水平增高。（3）人肝細(xì)胞對(duì)照組、低氟組、高氟組在同一時(shí)間點(diǎn)三組兩兩比較，在12h、24h、48h時(shí)TRPC5、TRPC6 mRNA表達(dá)都具有明顯差異（P＜0.05)；但濃度不變時(shí)，TRPC6 mRNA表達(dá)在不同時(shí)間點(diǎn)沒有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05)； TRPC5 mRNA對(duì)照組在12h、24h、48h時(shí)表達(dá)無

5、明顯差異（P>0.05)，低氟組12h與24h mRNA表達(dá)差異不顯著（P>0.05)，但在48h時(shí)出現(xiàn)顯著差異（P＜0.05)，高氟組12h、24h、48h時(shí)mRNA表達(dá)都具有明顯差異（P＜0.05)（4）Western Bolt測(cè)定大鼠肝組織TRPC5、TRPC6蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示對(duì)照組與低氟組、高氟組比較TRPC5、TRPC6表達(dá)水平有顯著差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且隨染氟濃度增加，表達(dá)水平更高。（5）對(duì)照組、低

6、氟組、高氟組從12h時(shí)間點(diǎn)人肝細(xì)胞TRPC5、TRPC6蛋白表達(dá)水平明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異（P＜0.05),但濃度不變時(shí)，TRPC6蛋白表達(dá)在不同時(shí)間點(diǎn)沒有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05)，TRPC5蛋白對(duì)照組在12h、24h、48h時(shí)表達(dá)無明顯差異（P>0.05)，低氟組12h與24h蛋白表達(dá)差異不顯著（P>0.05)，但在48h時(shí)出現(xiàn)顯著差異（P＜0.05)，高氟組12h、24h、48h時(shí)蛋白表達(dá)都具有明顯差異（P＜0.0