Trpc6對(duì)胃癌增殖及放療增敏的研究.pdf

1、目的：①檢測(cè)人胃癌組織及癌旁正常組織中Trpc6蛋白的表達(dá)，研究它與胃癌的關(guān)系。②探討Trpc6對(duì)胃癌AGS細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞周期的影響及其可能機(jī)制。③探討Trpc6通道在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。④探討Trp阻斷劑SKF96365對(duì)腫瘤細(xì)胞AGS放療增敏的影響。⑤探討TRPC6通道在胃癌放療增敏的作用。 方法：⑴應(yīng)用Western blot檢測(cè)胃癌組織及癌旁正常組織中通道蛋白的表達(dá)。⑵采用細(xì)胞計(jì)數(shù)和流式細(xì)胞儀的方法了解Trp阻斷劑SK

2、F96365阻斷Trp后對(duì)AGS細(xì)胞增生的影響。⑶用10只BALB/c裸鼠，隨機(jī)分為GFP、DN-Trpc6兩組，每組5只。對(duì)照組裸鼠均皮下注射病毒轉(zhuǎn)染GFP(Ad-GFP)的胃癌AGS細(xì)胞1×106/只，治療組裸鼠均皮下注射病毒轉(zhuǎn)染DNC6(Ad-DNC6)的胃癌AGS細(xì)胞1×106/只，觀察裸鼠的一般情況，每周測(cè)量?jī)纱文[瘤的體積，在第10周處死裸鼠，測(cè)量腫瘤的體積和重量。⑷采用流式細(xì)胞儀的方法了解Trp阻斷劑SKF96365對(duì)AGS

3、細(xì)胞周期的影響；根據(jù)流式細(xì)胞儀的結(jié)果，在5μM SKF96365作用8小時(shí)后對(duì)AGS細(xì)胞進(jìn)行放療，計(jì)算SF2、細(xì)胞生存曲線、D0值、Dq值、SF2的放療增敏率、D0的放療增敏率、Dq的放療增敏率。⑸用20只BALB/c裸鼠，隨機(jī)分為4組，分別是：對(duì)照組、SKF96365組、單純放療組和SKF96365聯(lián)合放療組，每組5只。四組裸鼠均皮下注射AGS胃癌細(xì)胞1×106/只。對(duì)照組在皮下注射腫瘤細(xì)胞后第5天開(kāi)始每天腹腔注入100ul的生理鹽水

4、；SKF96365組和放療聯(lián)合SKF96365組在皮下注射腫瘤細(xì)胞后第5天開(kāi)始每天腹腔注射SKF9636520mg/Kg，共7天；單純放療組和SKF96365聯(lián)合放療組在皮下注瘤后第7天開(kāi)始進(jìn)行放療，電子線7Mev，2Gy/天，共5天。觀察裸鼠的一般情況，每周測(cè)量?jī)纱文[瘤的體積，計(jì)算各組腫瘤體積到達(dá)0.4cm3的時(shí)間，計(jì)算GD值和EF值，在第12周處死裸鼠，測(cè)量腫瘤的體積和重量。 結(jié)果：①16對(duì)正常和胃癌配對(duì)標(biāo)本組織中，均有Tr

5、pc6蛋白的表達(dá)，其中6對(duì)胃癌組織TRPC6表達(dá)高于癌旁正常組織。②Trp阻斷劑SKF96365呈時(shí)間依賴(lài)的方式阻滯AGS細(xì)胞的增生。③兩組裸鼠一般情況無(wú)差異性變化；在注射第2、4、8周，對(duì)照組和治療組腫瘤體積為(mm3)：89.3±39.6 versus37.4±12.8(P<0.01):388.8±116.4 versus95.8±53.9(P<0.01)；788.9±181.8 versus159.7±87.5(P<0.01)；對(duì)

6、照組和治療組腫瘤重量為0.72±0.12g versus0.41±0.19g(P<0.01)。④AGS細(xì)胞的貼壁率(plate efficiency PE)是32％；與對(duì)照組相比SKF96365組的克隆形成率是0.99；單純放療組的SF2是0.39，SKF96365+放射組的SF2是0.21；根據(jù)SF2所得到的放療增敏率是1.85；放射+SKF96365組的D0值小于單純照射組(1.15 Gy vs1.49 Gy)；根據(jù)D0值求出的增強(qiáng)

7、比為1.30；放射+SKF96365組的Dq值小于單純照射組(1.04Gy vs1.93 Gy)；根據(jù)Dq值求出的增強(qiáng)比為1.84。⑤裸鼠一般情況無(wú)差異性變化；在治療后第12周，對(duì)照組、SKF96365組、單純放療組和SKF96365聯(lián)合放療組腫瘤體積為：1532±245.3mm3、1123±115.2mm3、889±89.8mm3、426±68.6mm3；對(duì)照組腫瘤平均體積從0.1cm3生長(zhǎng)至0.4cm3時(shí)所需天數(shù)為43天；單純照射組

8、腫瘤生長(zhǎng)延緩時(shí)間(GDRT)為12天；單純SKF96365組的GD SKF為19天；SKF96365+照射組的GD SKF+RT為39天；放射增敏因子EF=1.67。單純放療組和SKF96365聯(lián)合放療組腫瘤重量為1.4±0.45g versus0.6±0.26g；各組參數(shù)經(jīng)T檢驗(yàn)分析(P<0.05)。 結(jié)論：⑴Trpc6通道蛋白的過(guò)表達(dá)可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。⑵Trpc6通道參與細(xì)胞增生和細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)，其可能機(jī)制是調(diào)節(jié)pc