IL-6對HepG2細胞載脂蛋白M表達的影響.pdf

1、目的:載脂蛋白M(apoM)是由Xu和Dahlbaek于1999年發(fā)現(xiàn)并從乳糜微粒中分離和克隆,分子量為26KD。人類apo M基因定位于第6號染色體短臂,緊鄰MHC-Ⅲ基因區(qū)。該蛋白屬于疏水性分子結(jié)合蛋白家族(lipocalinfamily)成員,主要存在于人血漿高密度脂蛋白(HDL),少量存在于富甘油三酯脂蛋白(TRL)及低密度脂蛋白(LDL)中。最新的研究表明,載脂蛋白M可能對2型糖尿病大血管病變有保護作用,對抗動脈粥樣硬化。2型

2、糖尿病合并大血管病變病人IL-6比正常人明顯增高,作為炎癥反應(yīng)的核心細胞因子,IL-6在2型糖尿病大血管并發(fā)癥中的作用備受關(guān)注,鑒于此,本課題在體外研究IL-6對人肝母細胞瘤細胞(HepG2)apoM表達的影響,進而探索2型糖尿病合并大血管病變與apoM、IL-6相關(guān)的發(fā)病機制。
　　 方法:
　　 1.體外培養(yǎng)HepG2細胞,分別以不同濃度的IL-6(1.25,2.5,5,10,20,40,80ng/ml)干預(yù)細胞24

3、小時,提取細胞總RNA,應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄PCR、瓊脂糖凝膠電泳、實時熒光定量PCR法檢測mRNA水平的HepG2細胞載脂蛋白M的表達量,并同時檢測另一種載脂蛋白apoAI的表達,用同樣的干預(yù)方式,檢測IL-1a對apoM表達的影響。用蛋白免疫印跡法(WB)檢測分泌到培養(yǎng)基中的載脂蛋白M的表達量。
　　 2.用濃度為2.5ng/ml的IL-6對HepG2細胞進行不同時間干預(yù)(0h、1h、3h、6h、12h、24h),應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄PCR、瓊

4、脂糖凝膠電泳和實時熒光定量PCR方法檢測apoM的表達,考察IL-6干預(yù)時間不同對apoM表達的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.IL-6(1.25,2.5,5,10,20,40,80ng/ml)對HepG2細胞apoM的表達具有抑制作用,與對照組0ng/ml比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。IL-6濃度從0上升到80ng/ml,apoM的相對表達水平逐漸降低,IL-6濃度0ng/ml組,1.25ng/ml組分別與其他各組比較差異均有

5、統(tǒng)計學(xué)意義,且0ng/ml組、1.25ng/ml組、2.5ng/ml組之間呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。但是不同濃度的IL-6(1.25,2.5,5,10,20,40,80ng/ml)對HepG2細胞干預(yù),apoA1表達水平?jīng)]有統(tǒng)計學(xué)差異,IL-1a(1.25,2.5,5,10,20,40,80ng/ml)對apoM表達的影響亦無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 2.時間依賴實驗結(jié)果顯示,IL-6干預(yù)時間不同,其對HepG2細胞apoM的抑制程度有不

6、同,IL-6干預(yù)HepG2細胞12h,和IL-6干預(yù)24h對apoM的抑制作用表現(xiàn)顯著,且后者大于前者。而小于12h的干預(yù),抑制作用不明顯。
　　 結(jié)論:IL-6能夠抑制HepG2細胞載脂蛋白M的表達,這種抑制呈劑量依賴性,并且具有特異性和飽和性。IL-6抑制apoM的表達,apoM的表達降低削弱了apoM對動脈粥樣硬化的保護作用,成為2型糖尿病患者合并大血管病變的又一發(fā)病機制。2型糖尿病合并大血管并發(fā)癥的發(fā)病機制是非常復(fù)雜的,