大鼠觸液核和腦脊液ENK的分布及其在神經(jīng)病理性疼痛條件下的表達(dá).pdf

1、目的：觀察大鼠觸液核和腦脊液中腦啡肽(Enkephalin，ENK)的分布及其在神經(jīng)病理性疼痛條件下的表達(dá)變化，探討觸液核在神經(jīng)病理性疼痛中的作用及其與腦脊液之間的關(guān)系。
　　方法：一、雄性SD大鼠(250±50g)6只，大鼠處死前48h側(cè)腦室引入CB-HRP追蹤定位觸液核，處死前由枕骨大孔抽取腦脊液。
　　(1)應(yīng)用免疫熒光化學(xué)雙重標(biāo)記技術(shù)與激光共聚焦顯微鏡技術(shù)相結(jié)合，檢測(cè)ENK在正常大鼠觸液核的分布。
　　(2)應(yīng)

2、用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)技術(shù)檢測(cè)ENK在腦脊液中分布。
　　二、雄性SD大鼠(250±50g)隨機(jī)分為神經(jīng)病理性疼痛組(CCI組)和假手術(shù)組(Sham組)，(n=6)。各組大鼠處死前48h側(cè)腦室引入CB-HRP追蹤定位觸液核，處死前由枕骨大孔抽取腦脊液。
　　(1)應(yīng)用電子Von Frey觸痛儀和熱輻射刺激儀測(cè)定機(jī)械縮足閾值(MWT)和熱縮足潛伏期(TWL)作為行為學(xué)觀察指標(biāo)。
　　(2)應(yīng)用免疫熒光化學(xué)雙重標(biāo)

3、記技術(shù)與激光共聚焦顯微鏡技術(shù)相結(jié)合，定位、鑒別和計(jì)數(shù)腦啡肽(ENK)在正常大鼠觸液核的分布及在神經(jīng)病理性疼痛條件下的表達(dá)變化。
　　(3)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)技術(shù)檢測(cè)Sham組和CCI組大鼠腦脊液中ENK含量的變化。
　　結(jié)果：一、正常大鼠
　　(1)正常大鼠觸液核內(nèi)可見CB-HRP/ENK陽性雙重標(biāo)記細(xì)胞(黃色)，計(jì)數(shù)為415±23。
　　(2)正常大鼠腦脊液中ENK含量為210.32±15.72

4、pg/ml。
　　二、神經(jīng)病理性疼痛大鼠
　　(1)行為學(xué)表現(xiàn)
　　神經(jīng)病理性疼痛條件下，CCI組MWT和TWL自3天起降低，持續(xù)至14天，7天達(dá)最低值(28.6±7.7g、9.52±1.71s)與Sham組(50.3±6.6g、16.78±2.03s)相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　(2)免疫熒光
　　各組免疫熒光圖片均顯示ENK(綠色)、CB-HRP(紅色)和CB-HRP/ENK(黃色)免

5、疫陽性細(xì)胞。CCI組3d、7d、10d和14d四個(gè)時(shí)程CB-HRP/ENK雙標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)為：469±29、584±35、522±28和477±26；與Sham組：420±34、415±23、410±34、406±29比較明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　(3)EUSA
　　CCI組3d、7d、10d和14d時(shí)ENK含量較Sham組顯著增多(P<0.05)；7d時(shí)ENK含量達(dá)峰值(278.37±14.80 pg

6、/ml)，與Sham組(219.01±18.92 pg/ml)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　(4)相關(guān)性分析
　　神經(jīng)病理性疼痛條件下，免疫熒光雙重標(biāo)記細(xì)胞計(jì)數(shù)與腦脊液腦啡肽濃度呈正相關(guān)，r=0.793，p<0.01
　　結(jié)論：(1)正常大鼠觸液核表達(dá)ENK；正常大鼠腦脊液中含有ENK。
　　(2)確定神經(jīng)病理性疼痛模型建立成功；大鼠腦實(shí)質(zhì)的特定部位恒定存在觸液核團(tuán)；神經(jīng)病理性疼痛條件下，觸液核EN