正常大鼠觸液核TRPA1的分布及其在神經病理性痛條件下的表達.pdf

1、目的：觀察正常大鼠觸液核內TRPA1的分布及其在神經病理疼痛過程中的表達變化，探討觸液核的功能及神經病理性疼痛形成的可能機制。
　　方法：一、雄性SD大鼠(250±50g)6只，大鼠處死前48h側腦室引入CB-HRP追蹤定位觸液神經元，應用免疫熒光化學雙重標記技術與激光共聚焦顯微鏡技術相結合，檢測TRPA1在正常大鼠觸液核的分布。
　　二、雄性SD大鼠(250±50g)隨機分為神經病理性痛組(CCI組)，假手術組(Sham組

2、)。
　　(1)行為學測定(n=8)：應用電子Von Frey觸痛儀和熱輻射刺激儀測定機械縮足閾值(MWT)和熱縮足潛伏期(TWL)作為行為學觀察指標。以觀察疼痛隨時程的變化。
　　(2)觀察各神經病理性疼痛各時間點TRPA1在觸液核中的表達變化：復制神經病理性痛組及假手術組模型，每組又隨機分為第0天組，第1天組，第3天組，第5天組，第7天組，第10天組和第14天組七個亞組(n=6)。各組動物處死前48小時側腦室注射CB-H

3、RP以標記觸液神經元，取觸液核所在段腦組織，冰凍切片，做CB-HRP/TRPA1免疫熒光雙標反應。用激光共聚焦顯微鏡技術觀測比較TRPA1隨神經病理性疼痛時程變化在大鼠觸液核中的表達變化。
　　結果：一、免疫熒光圖片顯示觸液核主要存在于中腦導水管腹側中線腦實質內和橋腦上段第四腦室的灰質內。正常條件下，觸液核內見有CB-HRP/TRPA1受體陽性雙重標記細胞，計數為249±19。
　　二、行為學表現
　　Sham組術前與

4、術后TWL與MWT數值均無顯著性差異(P>0.05)。CCI組第0天，第1天，第3天，第5天，第7天，第10天和第14天的TWL與MWT值分別為(15.64±1.62，55.95±6.82)、(15.17±3.03，54.71±5.46)、(12.46±2.27，42.29±5.84)、(10.40±2.55，33.89±4.66)、(6.13±1.33，19.38±3.81)、(9.67±1.42，30.40±4.34)、(12.09

5、±2.47，38.93±5.46)。CCI組第0天、第1天與Sham組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，CCI組第3、5、7、10、14天MWT與TWL值與Sham組比較降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。CCI組第1天MWT與TWL值與第0天比較無明顯差異(P>0.05)，第3、5、7、10、14天MWT與TWL值與第0天比較，低于第0天(P<0.01)，且自第3天開始降低，至第7天降至最低。
　　三、免疫熒光

6、　　各組大鼠免疫熒光圖片均顯示TRPA1(綠色)、CB-HRP(紅色)和CB-HRP/TRPA1(黃色)免疫陽性細胞。CCI組與Sham組CB-HRP標記陽性神經元，組間無明顯差異(P>0.05)。Sham組術前與術后CB-HRP/TRPA1雙標神經元數目無明顯差異(P>0.05)。CCI第0天，第1天，第3天，第5天，第7天，第10天和第14天的CB－HRP/TRPA1雙標神經元數目分別為(241±11)、(246±12)、(385±

7、16)、(501±20)、(596±29)、(493±17)和(383±18)。CCI組第0天、第1天CB－HRP/TRPA1雙標神經元數與Sham組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，CCI組第3、5、7、10和14天五個時間點CB－HRP/TRPA1雙標神經元數與Sham組比較及與差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。CCI組第1天大鼠CB-HRP/TRPA1雙標陽性細胞計數與0天比較無差異性(P>0.05)，第3、5、7、10、1

8、4天與0天比較增多(P<0.01)，自第3天開始增多，至第7天所有CB－HRP陽性細胞均與TRPA1共表達，至第10天CB－HRP/TRPA1雙標陽性細胞數有所下降。
　　結論：一、正常大鼠觸液神經核團內存在TRPA1。
　　二、確定神經病理性疼痛模型建立成功；大鼠腦實質的特定部位恒定存在觸液核團；神經病理性疼痛條件下，觸液核TRPA1表達增多，并與神經病理性痛行為時相一致，提示觸液核可能是通過TRPA1受體在對神經病理性疼