解脲支原體感染人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　以UU1感染和非感染的人正常子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞為研究對象，應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，分析比較在感染與非感染UU1的情況下，人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞胞內(nèi)蛋白質(zhì)的表達(dá)變化，并對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，期望找到與UU發(fā)病相關(guān)的蛋白質(zhì)，為研究UU發(fā)病機(jī)制、篩選UU感染相關(guān)標(biāo)志物提供新的研究方法和線索。
　　方法：
　　本課題采用體外實驗的方法，以人正常子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞作為模型進(jìn)行研究，首先以不同濃度UU1感染人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞，然

2、后通過MTT實驗，測定人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞感染后的存活率，選用1×107copy/ml UU1感染人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞，并設(shè)陰性對照組（不添加UU1僅加等量的新鮮UU培養(yǎng)液），于24小時后分別提取細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)，處理結(jié)束后，提取各組的胞內(nèi)蛋白質(zhì)，經(jīng)2D Clean-up試劑盒純化，進(jìn)行蛋白質(zhì)定量，并用熒光染料Cy2、Cy3及Cy5進(jìn)行標(biāo)記，然后將各組蛋白進(jìn)行2D-DIGE電泳，得到Cy2、Cy3及Cy5標(biāo)記的非感染和UU1感染的人子宮內(nèi)膜上

3、皮細(xì)胞凝膠圖譜，通過DeCyder6.5差異分析軟件進(jìn)行分析比對后，再通過MALDI-TOF-MS質(zhì)譜對其進(jìn)行鑒定，并利用生物信息學(xué)對質(zhì)譜鑒定出的差異蛋白質(zhì)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：
　　建立了非感染和UU1感染的人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞凝膠圖譜。通過DeCyder6.5軟件分析，UU1處理人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞24小時后發(fā)現(xiàn)有41個蛋白點與對照組比較在量上顯著增加，而有19個蛋白點表達(dá)明顯降低。利用MALDI-TOF-MS技術(shù)，我們初步

4、鑒定了52個在UU1處理組中表達(dá)有變化的蛋白點，其中上調(diào)表達(dá)蛋白質(zhì)34個、下調(diào)表達(dá)蛋白質(zhì)18個。在這些差異表達(dá)蛋白質(zhì)中，我們通過生物信息學(xué)方法查詢后發(fā)現(xiàn)，其主要的生物學(xué)功能涉及細(xì)胞生理過程的多個方面，包括細(xì)胞免疫及防御、細(xì)胞內(nèi)蛋白轉(zhuǎn)運、細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)、細(xì)胞周期、細(xì)胞形態(tài)發(fā)生、蛋白質(zhì)翻譯、修飾、水解與折疊、蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、RNA聚合酶Ⅱ啟動子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控、鈣離子介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)代謝過程相關(guān)、核mRNA剪切及氧化磷酸化等方面。

5、
　　結(jié)論：
　　1、通過比較蛋白質(zhì)組學(xué)的方法鑒定出52個差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，提示UU1感染人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞能引起細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的差異表達(dá)。
　　2、通過生物信息學(xué)分析對52個差異蛋白質(zhì)進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，并對其進(jìn)行了GO注釋，提示UU1感染與細(xì)胞免疫及防御、細(xì)胞內(nèi)蛋白轉(zhuǎn)運、細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)、細(xì)胞周期、細(xì)胞形態(tài)發(fā)生等生物學(xué)過程相關(guān)。
　　3、篩選了多個與UU1感染相關(guān)的差異蛋白質(zhì)，其中熱休克蛋白的表達(dá)上升