利用復合誘變與原生質(zhì)體融合提高中性纖維素酶活力的研究.pdf

1、特異腐質(zhì)霉(Humicolainsolens)是一株中國科學院微生物研究所于八十年代篩選獲得的產(chǎn)中性纖維素酶的優(yōu)良菌株。 通過對Humicolainsolens進行離子束注入和原生質(zhì)體紫外照射復合誘變，得到正突變菌株H14-2，其CMC酶活力和濾紙酶活力分別為82.56IU/ml和5.77IU/ml，且傳代后性能穩(wěn)定，對中性纖維素酶的研究和生產(chǎn)具有積極意義。同時，對Humicolainsolens原生質(zhì)體的釋放方式進行了顯微鏡觀

2、察。 確定康寧木霉T7(TrichodermakoningiiT7)原生質(zhì)體的制備及再生條件為：菌絲培養(yǎng)時間為18h；高滲緩沖液為0.5mol/L、NaCl，0.05mol/LPBS緩沖液，pH6.0；10mg/ml蝸牛酶酶解2h，以0.5mol/L、NaCl作為滲透壓穩(wěn)定劑的土豆汁再生培養(yǎng)基上進行再生。在該條件下，原生質(zhì)體產(chǎn)量平均可達到3×107個/ml左右，再生率也可達到65％左右。 對Humicolainsolen

3、s與Trichodermakoningii進行原生質(zhì)體融合條件的選擇：采用60℃，30min熱滅活TrichodermakoningiiT7原生質(zhì)體后與HumicolainsolensH14-2活原生質(zhì)體等量融合，融合條件為：PEG6000濃度為30％、Ca2+濃度為100mmol/L、37℃保溫20min，并得到融合子。對融合子HRT-1進行傳代培養(yǎng)性質(zhì)穩(wěn)定，其在菌落形態(tài)和發(fā)酵能力方面均偏向親本Trichodermakoningii一