云南省德宏州HCV分子流行病學研究及黑猩猩SAMHD1表達載體的構建與真核表達.pdf

1、丙型肝炎病毒(Hepatitis CVirus，HCV)能感染人肝臟細胞，引起急性和慢性的肝炎，嚴重威脅人類健康。根據核苷酸序列的差異，HCV可分為6個基因型，而每個基因型又可分為很多亞型。HCV基因型分布具有明顯的地域性差異，其中基因型1、2、3在全球普遍流行，而基因型4、5、6的分布范圍較窄，呈現出地方性流行。在我國主要流行基因型1、2、3和6。
　　HCV的傳播與毒品轉運途徑密切相關，靜脈吸毒已成為HCV傳播的一個重要途徑。

2、位于中緬邊境的德宏傣族景頗族自治州是中緬之間重要的通商口岸，貿易交流頻繁，也是毒品從生產基地“金三角”向中國內陸及其他鄰近國家轉運的重要通道，德宏也成為HCV感染的重災區(qū)。因此，對德宏地區(qū)靜脈吸毒人群深入進行分子流行病學調查，了解德宏靜脈吸毒人群HCV分子流行病學特征和傳播趨勢，對制定HCV防控策略具有重要的參考價值。在本研究中我們篩查的德宏靜脈吸毒者的血液樣品中共有264份為HCV陽性樣品。經過病毒RNA抽提，反轉錄巢式PCR擴增C/

3、E2、NS5B片段和測序，分別對獲得的C/E2序列和NS5B序列進行系統(tǒng)進化分析，確定其基因型。最終共獲得190份HCV陽性樣本的序列，包括180條C/E2和152條NS5B片段序列。分型結果顯示，190份樣品中1a亞型17例、1b亞型2例、3a亞型16例、3b亞型69例、6n亞型32例、6u亞型28例，另外1例疑似雙感染或重組，有5例為新亞型6x。通過對德宏和其它地區(qū)HCV基因型分布的比較發(fā)現，德宏HCV基因型分布與其它地區(qū)顯著不同，

4、其中3b亞型所占比例明顯高于其它地區(qū)，而1b亞型檢出率很低。值得注意的是，德宏HCV6u亞型所占比例高達15％。6u亞型病毒最初是2008年由一株來自德宏的分離株經全基因組測序后命名的，系統(tǒng)進化分析顯示該毒株能與之前兩株來自緬甸的病毒株聚集在一起，此后在中國其他地區(qū)陸續(xù)發(fā)現新的6u病毒株，但流行率都很低（低于2％）。因此6u亞型病毒在德宏的高流行率表明德宏可能是6u亞型的起源地或者是6u亞型從緬甸向中國內陸傳播的入口。此外，從系統(tǒng)進化樹

5、上可以看出，有5個分離株聚集在亞型6m和6n之間，隨后通過遺傳距離分析確定其為新的亞型6x。與數據庫中其他聚集在6m和6n之間的未分型的序列DH027一起構建系統(tǒng)發(fā)生樹發(fā)現，這五個6x亞型的分離株不能和DH027聚集在一起。由于DH027同樣來自于德宏，說明HCV基因型6在德宏的流行情況極其復雜，還存在很多未知的新亞型。
　　HIV與HCV享有相同的傳播途徑，我們對HIV的關注點在于其病毒輔助蛋白與限制因子的相互作用上。SAMHD

6、1是最新發(fā)現的HIV限制因子，能限制HIV-1對髓系細胞的感染，但是其限制作用被HIV-1的輔助蛋白Vpx拮抗，原因是Vpx能誘導SAMHD1進入宿主細胞蛋白酶體降解。對靈長類SAMHD1和慢病毒輔助蛋白Vpx及Vpr的研究發(fā)現，慢病毒輔助蛋白Vpx/Vpr誘導SAMHD1降解具有種屬特異性。運用祖先狀態(tài)構建和時空動力學分析，發(fā)現靈長類SAMHD1與慢病毒Vpx的共進化導致在HIV-1祖先病毒中vpx基因的丟失。我們推測HIV-1祖先病