補(bǔ)腎安胎方及其拆方對(duì)超促排卵小鼠孕早期血管生成的影響.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分 補(bǔ)腎安胎方及其拆方對(duì)超促排卵小鼠圍著床期子宮內(nèi)膜形態(tài)及血管密度的影響
　　目的:
　　探討補(bǔ)腎安胎方及其拆方對(duì)超促排卵小鼠圍著床期子宮內(nèi)膜形態(tài)的影響。
　　方法:
　　將雌性小鼠50只隨機(jī)均分成五組：正常組（N）、COH模型組（M）、補(bǔ)腎組（BS）、活血組（HX）以及補(bǔ)腎安胎組（BH）。正常組雌鼠予以0.1mL生理鹽水腹腔注射，其余的四組在相同時(shí)間予以10IU

2、 PMSG腹腔注射，48小時(shí)后正常組予以0.1mL生理鹽水腹腔注射，其余四組給予10IU HCG腹腔注射。此后雌鼠與雄鼠以2:1的比例進(jìn)行交配，次日8：00檢查陰道。發(fā)現(xiàn)陰栓者記為妊娠第1天。腹腔注射當(dāng)天起，每天早晨9:00正常組及模型組給予生理鹽水0.3mL灌胃，各中藥組分別給予相應(yīng)中藥0.3mL灌胃，直至處死當(dāng)天。與妊娠第4天處死小鼠。光鏡下觀察子宮內(nèi)膜形態(tài)及微血管密度（HE染色，CD34免疫組化），掃面電鏡觀察胞飲突。
　　

3、結(jié)果:
　　正常組子宮內(nèi)膜基質(zhì)層排列較緊密，COH模型組小鼠的子宮壁橫切面上，則為較松散排列的基質(zhì)層，補(bǔ)腎組、活血組和補(bǔ)腎安胎組的子宮內(nèi)膜基質(zhì)層排列較緊密；與正常組相比，模型組和補(bǔ)腎組小鼠的子宮內(nèi)膜厚度明顯較薄（P<0.05）；與模型組相比，各中藥組子宮內(nèi)膜厚度明顯增加（P<0.001）；且補(bǔ)腎組和補(bǔ)腎安胎組之間相比有顯著性差異（P<0.05），補(bǔ)腎安胎組子宮內(nèi)膜厚度與正常組最為接近。與正常組相比較，模型組的微血管密度明顯較低（P

4、<0.001），而與模型組相比，各中藥組微血管密度有顯著增加（P<0.01），且補(bǔ)腎安胎組微血管密度與正常組最為接近。正常組、活血組和補(bǔ)腎安胎組中，發(fā)育良好/發(fā)育完全的胞飲突從分泌細(xì)胞的頂端突出，形狀大小幾乎相同，而在模型組中，胞飲突見(jiàn)不同程度的塌陷，細(xì)胞膨脹減少，補(bǔ)腎組則多見(jiàn)發(fā)育中的胞飲突，整體上補(bǔ)腎安胎組胞飲突形態(tài)最接近正常組；與正常組相比，模型組的胞飲突計(jì)數(shù)明顯減少（P<0.01），而與模型組相比，活血組和補(bǔ)腎安胎組的胞飲突計(jì)數(shù)顯

5、著增加（P<0.01）；當(dāng)與補(bǔ)腎組相比，活血組和補(bǔ)腎安胎組的胞飲突計(jì)數(shù)有明顯增加（P<0.05）。
　　結(jié)論:
　　補(bǔ)腎方，活血方以及補(bǔ)腎安胎方均能通過(guò)調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜厚度，微血管密度，胞飲突來(lái)改善子宮著床窗微環(huán)境，并且補(bǔ)腎安胎方以及活血方效果要優(yōu)于補(bǔ)腎方，補(bǔ)腎安胎方效果最好。
　　第二部分 補(bǔ)腎安胎方及其拆方對(duì)超促排卵小鼠子宮內(nèi)膜Ang-1、Ang-2、VEGF的影響
　　目的:
　　探討補(bǔ)腎安胎方及其拆方對(duì)

6、超促排卵小鼠孕早期子宮內(nèi)膜Ang-1、Ang-2、VEGF的影響。
　　方法:
　　將雌性小鼠150只隨機(jī)均分成五組：正常組（N）、COH模型組（M）、補(bǔ)腎組（BS）、活血組（HX）以及補(bǔ)腎安胎組（BH）。正常組雌鼠予以0.1mL生理鹽水腹腔注射，其余的四組在相同時(shí)間予以10IU PMSG腹腔注射，48小時(shí)后正常組予以0.1mL生理鹽水腹腔注射，其余四組給予10IU HCG腹腔注射。此后雌鼠與雄鼠以2:1的比例進(jìn)行交配，次日

7、8：00檢查陰道。發(fā)現(xiàn)陰栓者記為妊娠第1天。腹腔注射當(dāng)天起，每天早晨9:00正常組及模型組給予生理鹽水0.3mL灌胃，各中藥組分別給予相應(yīng)中藥0.3mL灌胃，直至處死當(dāng)天。分別在妊娠第5、6、8天處死小鼠，留取標(biāo)本。采用免疫組化與實(shí)時(shí)熒光定量PCR觀察Ang-1、Ang-2、VEGF的蛋白與mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組化結(jié)果顯示：與正常組相比，模型組子宮內(nèi)膜Ang-1蛋白表達(dá)在妊娠第5、6天明顯升高，妊娠第8

8、天明顯降低（P<0.05）；與模型組相比，補(bǔ)腎組、活血組在妊娠第6、8天，補(bǔ)腎安胎組在妊娠第5、6、8天差異有顯著性（P<0.05），且補(bǔ)腎安胎組在妊娠第8天與補(bǔ)腎組相比較有明顯差異（P<0.05），補(bǔ)腎安胎組Ang-1蛋白表達(dá)趨勢(shì)最接近正常組。與正常組相比，模型組子宮內(nèi)膜Ang-2蛋白表達(dá)在妊娠第5、6、8天明顯降低（P<0.05）；與模型組相比，活血組在妊娠第5、6天明顯升高，補(bǔ)腎安胎組在妊娠第5、6、8天明顯升高（P<0.05），

9、補(bǔ)腎安胎組Ang-2蛋白表達(dá)趨勢(shì)最接近正常組。與正常組相比，模型組子宮內(nèi)膜VEGF蛋白水平在妊娠第5天明顯升高，妊娠第6、8天明顯降低，活血組妊娠第5天明顯升高，補(bǔ)腎組妊娠第6天明顯降低（P<0.05）；與模型組相比，補(bǔ)腎安胎組在妊娠第5、6、8天均有顯著性差異，而活血組在妊娠第6天有顯著性差異（P<0.05），且在妊娠第6天，活血組，補(bǔ)腎安胎組與補(bǔ)腎組相比較有顯著性差異（P<0.05），補(bǔ)腎安胎組VEGF蛋白表達(dá)趨勢(shì)最接近正常組。

10、r>　　2.Real-time PCR結(jié)果顯示：與正常組相比，模型組子宮內(nèi)膜Ang-1 mRNA在妊娠第5、6天明顯升高，妊娠第8天明顯降低（P<0.05）；與模型組相比，補(bǔ)腎安胎組在妊娠第6、8天有顯著性差異，補(bǔ)腎組及活血組在妊娠第8天有顯著性差異（P<0.05），補(bǔ)腎安胎組Ang-1 mRNA表達(dá)趨勢(shì)最接近正常組。與正常組相比較，模型組子宮內(nèi)膜Ang-2 mRNA在妊娠第5、6、8天顯著降低，補(bǔ)腎組在妊娠第5、8天顯著降低（P<0.

11、05）；與模型組相比，補(bǔ)腎安胎組在妊娠第5、6、8天明顯升高，補(bǔ)腎組和活血組在妊娠第6天明顯升高（P<0.05），補(bǔ)腎安胎組Ang-2 mRNA表達(dá)趨勢(shì)最接近正常組。與正常組比較，模型組，補(bǔ)腎組，活血組子宮內(nèi)膜VEGF mRNA在妊娠第5天明顯升高，模型組，補(bǔ)腎組在第6、8天明顯降低（P<0.05）；與模型組相比，活血組和補(bǔ)腎安胎組在妊娠第6、8天明顯升高（P<0.05），且與補(bǔ)腎組相比，活血組在妊娠第6、8天，補(bǔ)腎安胎組在妊娠第8天有

12、顯著性差異（P<0.05），補(bǔ)腎安胎組VEGF mRNA表達(dá)趨勢(shì)最接近正常組。
　　結(jié)論:
　　補(bǔ)腎安胎方及其拆方可通過(guò)調(diào)節(jié)COH模型中Ang-1、Ang-2、VEGF的表達(dá)從而改善子宮內(nèi)膜的著床過(guò)程中的血管生成，促進(jìn)妊娠的成功發(fā)生。此外，活血方和補(bǔ)腎安胎方效果要優(yōu)于補(bǔ)腎方，其中補(bǔ)腎安胎方效果好。
　　第三部分 補(bǔ)腎安胎方及其拆方對(duì)超促排卵小鼠孕早期子宮內(nèi)膜COX-2、PGIS、PPARδ的影響
　　目的:

13、>　　探討補(bǔ)腎安胎方及其拆方對(duì)超促排卵小鼠孕早期子宮內(nèi)膜COX-2、PGIS、PPARδ的影響。
　　方法:
　　將雌性小鼠150只隨機(jī)均分成五組：正常組（N）、COH模型組（M）、補(bǔ)腎組（BS）、活血組（HX）以及補(bǔ)腎安胎組（BH）。正常組雌鼠予以0.1mL生理鹽水腹腔注射，其余的四組在相同時(shí)間予以10IU PMSG腹腔注射，48小時(shí)后正常組予以0.1mL生理鹽水腹腔注射，其余四組給予10IU HCG腹腔注射。此后雌鼠與雄

14、鼠以2:1的比例進(jìn)行交配，次日8：00檢查陰道。發(fā)現(xiàn)陰栓者記為妊娠第1天。腹腔注射當(dāng)天起，每天早晨9:00正常組及模型組給予生理鹽水0.3mL灌胃，各中藥組分別給予相應(yīng)中藥0.3mL灌胃，直至處死當(dāng)天。分別在妊娠第5、6、8天處死小鼠，留取標(biāo)本。采用免疫組化與實(shí)時(shí)熒光定量PCR觀察COX-2、PGIS、PPARδ的蛋白與mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組化結(jié)果顯示：與正常組相比，模型組子宮內(nèi)膜COX-2蛋白水平在妊

15、娠第5、6天明顯升高，在第8天明顯降低（P<0.05）；與模型組相比，各中藥組在妊娠第5天明顯降低，妊娠第8天明顯升高（P<0.05），補(bǔ)腎安胎組COX-2蛋白表達(dá)趨勢(shì)與正常組較為接近。與正常組相比，模型組子宮內(nèi)膜PGIS蛋白水平在妊娠第5、6、8天明顯降低（P<0.05）；與模型組相比，活血組與補(bǔ)腎安胎組PGIS蛋白水平在妊娠第5、6、8天明顯升高（P<0.05），補(bǔ)腎安胎組PGIS蛋白表達(dá)趨勢(shì)與正常組最為接近。與正常組相比，模型組子

16、宮內(nèi)膜PPARδ蛋白水平在妊娠第5、6、8天明顯降低（P<0.05），補(bǔ)腎組妊娠第8天明顯降低（P<0.05）；與模型組相比，補(bǔ)腎組蛋白水平在妊娠第5、6天明顯升高，活血組與補(bǔ)腎安胎組在妊娠第5、6、8天明顯升高（P<0.05）；與補(bǔ)腎組相比，活血組在妊娠第6、8天，補(bǔ)腎安胎組在妊娠第8天有顯著性差異，補(bǔ)腎安胎組PPARδ蛋白表達(dá)趨勢(shì)與正常組最為接近。
　　2.Real-time PCR結(jié)果顯示：與正常組比較，模型組子宮內(nèi)膜COX

17、-2 mRNA在妊娠第5、6、8天明顯升高（P<0.05）；與模型組相比較，補(bǔ)腎組在妊娠第5、6天明顯降低，活血組與補(bǔ)腎安胎組在妊娠第5、6、8天明顯降低（P<0.05），補(bǔ)腎安胎組COX-2 mRNA表達(dá)趨勢(shì)與正常組最為接近。與正常組相比，模型組子宮內(nèi)膜PGIS mRNA在妊娠第5、6天明顯降低，補(bǔ)腎組在妊娠第5天明顯降低（P<0.05）；與模型組相比，活血組和補(bǔ)腎安胎組在妊娠第5、6天明顯升高，且在妊娠第5天活血組和補(bǔ)腎安胎組與補(bǔ)腎

18、組相比，有顯著性差異（P<0.01），補(bǔ)腎安胎組PGIS mRNA表達(dá)趨勢(shì)與正常組最為接近。與正常組相比，模型組子宮內(nèi)膜PPARδmRNA在妊娠第5、6天明顯降低（P<0.05）；與模型組比較，活血組與補(bǔ)腎安胎組在妊娠第5、6天明顯升高（P<0.05），補(bǔ)腎安胎組PPARδmRNA表達(dá)趨勢(shì)與正常組最為接近。
　　結(jié)論:
　　這些結(jié)果表明補(bǔ)腎安胎方及其拆方均可通過(guò)調(diào)節(jié)COH模型中COX-2、PGIS和PPARδ的表達(dá)從而改善子