補腎活血方對血管性癡呆小鼠行為學(xué)的改善作用及其機制研究.pdf

1、目的:血管性癡呆(VD)是指腦血管疾病引起的腦功能損害所導(dǎo)致的獲得性智能損害綜合征,據(jù)不完全統(tǒng)計65歲以上老年人群中癡呆的患病率大約為5％,其中VD占20％左右,近年來隨著腦血管病發(fā)病率的升高,本病呈上升趨勢。補腎活血方經(jīng)前期臨床驗證,為治療VD的有效方藥,本研究通過觀察補腎活血方對VD小鼠行為學(xué)、腦組織病理形態(tài)學(xué)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白介素1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)以及血漿血栓素B2(TX

2、B2)、6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)等指標的影響,從抗氧化損傷、降低炎癥細胞因子、調(diào)節(jié)血流狀態(tài)等角度探討其對VD的作用機制,為臨床治療VD提供實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 清潔級雄性昆明小鼠72只,由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供,體重約35-40g,隨機抽取12只作為假手術(shù)組,剩余60只隨機分為:VD模型組(簡稱模型組)、補腎活血方高劑量治療組(簡稱高劑量組)、補腎活血方低劑量治療組(簡稱低劑量組

3、),尼莫地平治療對照組(簡稱尼莫地平對照組),共4組,每組15只。
　　 采用雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎,反復(fù)腦缺血-再灌注的造模方法制備VD小鼠模型。假手術(shù)組小鼠只分離出雙側(cè)頸總動脈,穿線后不結(jié)扎,不斷尾放血;其余各組小鼠分離并反復(fù)阻斷雙側(cè)頸總動脈血流,并且于距尾尖1cm處行斷尾放血,每只放血0.3mL,制備VD模型。
　　 各治療組在造模術(shù)后第2天按體重給藥進行治療,補腎活血方高、低劑量組小鼠分別以14.28g生藥/kg和7.

4、14g生藥/kg灌服補腎活血方水煎劑,尼莫地平對照組以15.58mg/kg灌服尼莫地平混懸液,假手術(shù)組和模型組小鼠均灌服與治療組等劑量的生理鹽水,每日1次。造模及給藥結(jié)束后剔出死亡小鼠。
　　 治療14d后,采用水迷宮檢測法、跳臺檢測法對其進行行為學(xué)檢測。行為學(xué)實驗結(jié)束后,各組小鼠分別斷頭取血3mL,采用放射免疫法測定血漿中TXB2、6-Keto-PGF1α的含量;冰盤上快速取腦,棄去嗅球及小腦,取右側(cè)大腦置于4％多聚甲醛固定,

5、乙醇逐級脫水、透明、浸透、石蠟包埋,切片,分別進行HE和硫堇染色,在光鏡下觀察海馬病理形態(tài)學(xué)的變化;取左側(cè)腦組織勻漿,采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD的活性,采用硫代巴比妥酸法測定MDA的含量,放免法測定IL-1β、TNF-α的含量。
　　 本研究實驗數(shù)據(jù)處理采用均數(shù)士標準差((-x)±s)表示,用SPSS forWindows13.0統(tǒng)計軟件處理,比較采用單因素方差分析,然后用Student-Newman-Keuls Test進行

6、組間兩兩比較,顯著性差異水平以0.05和0.01為標準。
　　 結(jié)果:
　　 造模及給藥結(jié)束后剔除死亡小鼠,各組剩余只數(shù)分別為:假手術(shù)組12只,模型組9只,高劑量組11只,低劑量組11只,尼莫地平對照組10只。治療14天后對實驗小鼠進行各項指標檢測。
　　 1：補腎活血方對VD小鼠行為學(xué)的影響
　　 1.1：補腎活血方對VD小鼠水迷宮學(xué)習(xí)成績的影響
　　 模型組與假手術(shù)組比較,小鼠游全程的時間顯著

7、延長,錯誤次數(shù)明顯增加,表明小鼠的學(xué)習(xí)成績下降,有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);各治療組與模型組比較,小鼠游全程的時間顯著縮短,錯誤次數(shù)明顯減少,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組和低劑量組學(xué)習(xí)成績明顯優(yōu)于尼莫地平對照組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 1.2：補腎活血方對VD小鼠水迷宮記憶成績的影響
　　 模型組與假手術(shù)組比較,小鼠游全程的時間顯著延長,錯誤次數(shù)明顯增加,表明小鼠記憶力減退,具

8、有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。各治療組與模型組比較,小鼠游全程的時間顯著縮短,錯誤次數(shù)明顯減少,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01),高劑量組記憶成績優(yōu)于尼莫地平對照組,其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),低劑量組有優(yōu)于尼莫地平對照組的趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 1.3：補腎活血方對VD小鼠跳臺實驗學(xué)習(xí)成績的影響
　　 模型組與假手術(shù)組比較,小鼠的反應(yīng)時間顯著延長,錯誤次數(shù)明顯增加,表明

9、小鼠的學(xué)習(xí)成績下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);各治療組與模型組比較,反應(yīng)時間均縮短,錯誤次數(shù)均減少,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組與尼莫地平對照組比較,反應(yīng)時間縮短,錯誤次數(shù)減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);高劑量組與低劑量組比較,反應(yīng)時間明顯縮短,有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 1.4：補腎活血方對VD小鼠跳臺實驗記憶成績的影響
　　 模型組與假手術(shù)組比較,小鼠的潛伏時

10、間顯著縮短,錯誤次數(shù)明顯增加,表明記憶成績下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);各治療組與模型組比較,潛伏時間均延長,錯誤次數(shù)均減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組與尼莫地平對照組比較,潛伏時間延長,錯誤次數(shù)減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);高劑量組與低劑量組比較,錯誤次數(shù)明顯減少,有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2：補腎活血方對VD小鼠海馬病理形態(tài)學(xué)的影響
　　 假手術(shù)組小鼠海

11、馬CA1區(qū)錐體細胞排列緊密,細胞核圓而大,核仁清晰,硫堇染色顯示,胞漿內(nèi)尼氏體豐富,神經(jīng)纖維密集,排列整齊。模型組小鼠海馬CA1區(qū)錐體細胞層次減少,排列稀疏,明顯脫失,胞漿內(nèi)尼氏體消失,細胞核體積變小,結(jié)構(gòu)不清,呈核固縮表現(xiàn),神經(jīng)纖維排列紊亂,膠質(zhì)細胞明顯增生。高劑量組海馬CA1區(qū)錐體細胞少量脫失,少數(shù)細胞核呈固縮表現(xiàn),神經(jīng)纖維排列比較整齊。低劑量組和尼莫地平對照組小鼠海馬CA1區(qū)錐體細胞部分脫失,部分細胞核固縮,呈三角形、多角形。

12、r>　　 3：補腎活血方對VD小鼠血漿TXB2和6-Keto-PGF1α含量的影響
　　 3.1：補腎活血方對VD小鼠血漿TXB2含量的影響
　　 模型組小鼠血漿TXBz含量較假手術(shù)組升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);經(jīng)用藥干預(yù)后,各治療組小鼠血漿TXB2含量較模型組明顯降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05或P＜0.01)。各治療組之間比較,高劑量組TXB2含量低于尼莫地平對照組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);低劑

13、量組有低于尼莫地平對照組的趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.2：補腎活血方對VD小鼠血漿6-Keto-PGF1α含量的影響
　　 模型組小鼠血漿6-Keto-PGF1α含量較假手術(shù)組明顯降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);經(jīng)用藥干預(yù)后,各治療組小鼠血漿6-Keto-PGF1α含量較模型組明顯升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);各治療組之間比較,高劑量組血漿6-Keto-PGF1α含量

14、高于尼莫地平對照組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);低劑量組有高于尼莫地平對照組的趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4：補腎活血方對VD小鼠腦組織SOD活性和MDA含量的影響
　　 4.1：補腎活血方對VD小鼠腦組織SOD活性的影響
　　 模型組小鼠腦組織SOD活性較假手術(shù)組明顯降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);經(jīng)用藥干預(yù)后,各治療組小鼠腦組織SOD活性均較模型組升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.0

15、1);各治療組之間比較,高劑量組小鼠腦組織SOD活性均較尼莫地平對照組升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),低劑量組有高于尼莫地平對照組的趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4.2：補腎活血方對VD小鼠腦組織MDA含量的影響
　　 模型組小鼠腦組織MDA含量較假手術(shù)組明顯升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);經(jīng)用藥干預(yù)后,各治療組小鼠腦組織MDA含量均低于模型組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)

16、;各治療組之間比較,高劑量組小鼠腦組織MDA含量低于低劑量組和尼莫地平對照組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);低劑量組有低于尼莫地平對照組的趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 5：補腎活血方對VD小鼠腦組織IL-1β和TNF-α含量的影響
　　 5.1：補腎活血方對VD小鼠腦組織IL-1β含量的影響
　　 模型組小鼠腦組織IL-1β含量較假手術(shù)組明顯升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);經(jīng)用藥干預(yù)后

17、,各治療組小鼠腦組織IL-1β含量較模型組明顯降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);各治療組之間比較,高劑量組、低劑量組腦組織IL-1β含量均低于尼莫地平對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組和低劑量組之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 5.2：補腎活血方對VD小鼠腦組織TNF-α含量的影響
　　 模型組小鼠腦組織TNF-α含量較假手術(shù)組明顯升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);經(jīng)用藥

18、干預(yù)后,各治療組小鼠腦組織TNF-α含量較模型組明顯降低,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);各治療組之間比較,高劑量組腦組織TNF-α含量低于尼莫地平對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);低劑量組有低于尼莫地平對照組的趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 本研究表明,腦缺血損傷是VD發(fā)生的重要原因,血管舒縮異常、血小板聚集、炎性細胞因子釋放、自由基代謝失常等多種病理因素參與腦缺血反應(yīng)過程,并加

19、劇神經(jīng)元損害,誘發(fā)癡呆。
　　 補腎活血方能顯著改善VD小鼠腦海馬病理形態(tài)學(xué),提高VD小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的作用。其可能機制為:
　　 1：調(diào)節(jié)TXB2/6-Keto-PGF1α平衡,抑制血小板聚集、改善血流和腦缺血狀態(tài),從而改善VD小鼠學(xué)習(xí)記憶能力。
　　 2：通過提高腦組織SOD活性,降低MDA含量,調(diào)節(jié)自由基代謝,減輕過氧化損傷,保護神經(jīng)元,從而改善VD小鼠學(xué)習(xí)記憶能力。
　　 3：通過降低腦組織IL-