補腎活血方對血管性癡呆小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子表達的影響.pdf

1、目的:本研究在成功建立血管性癡呆(VD)小鼠動物模型基礎上,觀察補腎活血方對VD小鼠腦組織堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)表達的影響,旨在從調(diào)節(jié)神經(jīng)營養(yǎng)因子(NTF)表達,減輕腦缺血損傷,修復和保護神經(jīng)元的角度探討該藥對VD的治療作用機制,為臨床治療VD提供實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 健康清潔級雄性昆明小鼠72只,體重35～40g,隨機抽取12只作為假手術組,其余60只隨機分為:模型

2、組、補腎活血高劑量組(簡稱“高劑量組”)、補腎活血低劑量組(簡稱“低劑量組”),尼莫地平對照組(簡稱“對照組”),每組15只。
　　 根據(jù)文獻報道,采用雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎,反復腦缺血再灌注的方法制備VD小鼠模型。造模結(jié)束后除去死亡小鼠,剩余只數(shù)分別為:假手術組12只,模型組9只,高、低劑量組各11只,對照組10只。造模結(jié)束后第2天各治療組分別按體重給藥治療,高、低劑量組分別以14.28g生藥/kg·d和7.14g生藥/kg·d灌服

3、補腎活血方水煎藥液,對照組以15.58 mg/kg·d灌服尼莫地平藥液,假手術組、模型組均灌服等劑量的0.5％的羧甲基纖維素鈉液,連續(xù)治療14 d。
　　 治療結(jié)束后,各組小鼠采用水迷宮法、跳臺法進行行為學實驗,然后斷頭處死小鼠,冰盤上快速取腦,棄去嗅球及小腦,取右側(cè)大腦置于4％多聚甲醛固定,乙醇逐級脫水、透明、浸透、石蠟包埋,切片,0.1％硫堇染色,光學顯微鏡下觀察海馬病理形態(tài)變化;取左腦組織勻漿,提取上清,采用雙抗體夾心AB

4、C-ELISA法檢測腦組織bFGF和BDNF含量,采用RT-PCR法檢測bFGF mRNA和BDNF mRNA表達的變化。
　　 數(shù)據(jù)運用SPSS for Windows13.0統(tǒng)計軟件處理,計量資料用均數(shù)±標準差(-x±s)表示,統(tǒng)計方法采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用q檢驗,顯著性差異水平以0.05和0.01為標準。
　　 結(jié)果:
　　 1.各組小鼠行為學的比較
　　 1.1.各組小鼠水迷宮學習成

5、績的比較與假手術組比較,模型組游全程時間顯著延長,錯誤次數(shù)明顯增加,具有統(tǒng)計學差異(P＜0.01);與模型組比較,各治療組游全程時間顯著縮短,錯誤次數(shù)明顯減少,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組和低劑量組與對照組比較,學習成績有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);高劑量組與低劑量組比較,學習成績無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 1.2.各組小鼠水迷宮記憶成績的比較與假手術組比較,模型組游全程時間顯著延長,錯誤次數(shù)明

6、顯增加,具有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。與模型組比較,各治療組游全程時間顯著縮短,錯誤次數(shù)明顯減少,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組與對照組比較,記憶成績有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);低劑量組與對照組比較,學習成績無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);高劑量組與低劑量組比較,學習成績無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 1.3.各組小鼠跳臺實驗學習成績的比較與假手術組比較,模型組小鼠的反應時間顯著延長,錯誤次數(shù)明顯增

7、加,具有統(tǒng)計學差異(P＜0.01);與模型組比較,各治療組反應時間縮短,錯誤次數(shù)減少,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05或P＜0.01);與對照組比較,高劑量組反應時間縮短,錯誤次數(shù)減少,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);高劑量組與低劑量組比較,反應時間明顯縮短,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);低劑量組與對照組比較,無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 1.4.各組小鼠跳臺實驗記憶成績的比較與假手術組比較,模型組小鼠的潛伏時間顯著縮短,錯誤次

8、數(shù)明顯增加,具有統(tǒng)計學差異(P＜0.01);與模型組比較,各治療組潛伏時間延長,錯誤次數(shù)減少,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組與對照組比較,潛伏時間延長,錯誤次數(shù)減少,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);高劑量組與低劑量組比較,錯誤次數(shù)減少,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);低劑量組與對照組比較,無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 2.各組小鼠海馬錐體細胞病理形態(tài)學的比較硫堇染色顯示,假手術組海馬輪廓清楚,CA1區(qū)錐

9、體細胞數(shù)目多,排列緊密,細胞核圓而大,核仁清晰,胞漿內(nèi)尼氏體豐富。模型組海馬CA1區(qū)錐體細胞數(shù)目明顯減少,排列稀疏,層次減少,胞漿內(nèi)尼氏體減少或消失,大部分細胞核體積變小、深染,結(jié)構(gòu)不清,呈核固縮表現(xiàn),有的呈三角形或多角形。高劑量組海馬CA1區(qū)錐體細胞僅有少量脫失,數(shù)目有所減少,排列較為緊密,層次較為清晰,有少數(shù)細胞核固縮。低劑量組和對照組小鼠海馬CA1區(qū)錐體細胞部分脫失,數(shù)目減少,排列較稀疏,有部分細胞核固縮為三角形或多角形,低劑量組

10、優(yōu)于對照組。
　　 3.各組小鼠腦組織bFGF含量的比較與假手術組比較,模型組小鼠腦組織bFGF含量明顯升高,二者有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。與模型組比較,各治療組小鼠腦組織bFGF含量均明顯升高,有統(tǒng)計學差異(P＜0.01),高劑量組與對照組比較,bFGF含量明顯升高,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05),低劑量組與對照組比較,bFGF含量有升高趨勢,但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);高劑量組與低劑量組比較,bFGF含量有升高趨勢,但

11、無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 4.各組小鼠腦組織BDNF含量的比較與假手術組比較,模型組小鼠腦組織BDNF含量明顯升高,二者有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。與模型組比較,各治療組小鼠腦組織BDNF含量均明顯升高,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05或P＜0.01);高劑量組與對照組比較,BDNF含量明顯升高,具有統(tǒng)計學差異(P＜0.01),低劑量組與對照組比較,BDNF含量有升高趨勢,但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);高劑量組與低劑量

12、組比較,BDNF含量明顯升高,具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　 5.各組小鼠腦組織bFGF mRNA表達相對含量的比較與假手術組比較,模型組小鼠腦組織bFGF mRNA表達相對含量明顯升高,二者有統(tǒng)計學差異(P＜0.01);與模型組比較,各治療組bFGF mRNA表達相對含量均明顯升高,有統(tǒng)計學差異(P＜0.01);高劑量組與對照組比較,bFGF mRNA表達相對含量明顯升高,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);低劑量組與對照組

13、比較,bFGF mRNA表達相對含量明顯升高,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);高劑量組與低照組比較,bFGF mRNA表達相對含量有升高趨勢,但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 6.各組小鼠腦組織BDNF mRNA表達相對含量的比較與假手術組比較,模型組小鼠腦組織BDNF mRNA表達相對含量明顯升高,二者有統(tǒng)計學差異(P＜0.01);與模型組比較,各治療組BDNFmRNA表達相對含量均明顯升高,有統(tǒng)計學差異(P＜0.01);

14、高劑量組與對照組比較,BDNF mRNA表達相對含量明顯升高,有統(tǒng)計學差異(P＜0.01);低劑量組與對照組比較,BDNF mRNA表達相對含量明顯升高,有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);高劑量組與低照組比較,bFGF mRNA表達相對含量有升高趨勢,但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 補腎活血方可改善實驗性VD模型小鼠病理形態(tài)學,促進學習記憶能力,其治療VD的機理之一是調(diào)節(jié)腦組織bFGFmRNA和BDNF