豚鼠實驗性近視眼視網(wǎng)膜色素上皮細胞HGF表達變化及鈣離子的研究.pdf

1、目的：建立豚鼠鏡片誘導型近視眼模型（Lens induced myopia，LIM），觀察豚鼠眼球前部及后極部視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細胞中肝細胞生長因子（HGF）的表達變化。研究HGF在近視中的作用，并采用激光掃描共聚焦顯微鏡（SLCM）對正常組和LIM組RPE細胞的鈣離子進行測定，從離子水平進一步探討近視的發(fā)病機理。
　　 方法：取2周齡豚鼠10只，隨機選取一只眼為實驗眼（LIM組）對側眼為自身對照眼（Self-contro

2、l，SC組）。實驗眼是采用離焦點的方法用-10.00D[1]凹透鏡誘導成近視眼模型，實驗前后檢測每組豚鼠雙眼屈光狀態(tài)，用A超測雙眼眼軸長度。用細胞酶消化法原代培養(yǎng)豚鼠眼球前部及后極部RPE細胞，并傳1代。用免疫細胞化學法對培養(yǎng)細胞進行鑒定，并對每組前部及后極部RPE細胞HGF的表達進行定性半定量分析，用逆轉錄.多聚酶鏈反應（RT-PCR）法檢測前部及后極部RPE細胞HGFmRNA的表達。對豚鼠RPE細胞進行Fluo-3/AM負載，利用激

3、光掃描共聚焦顯微鏡測定LIM組及SC組RPE細胞鈣離子的變化。其結果用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。
　　 結果：
　　 1豚鼠實驗性近視的誘導結果：豚鼠經(jīng)過45天的凹透鏡誘導，實驗組與自身對照組比較，誘導出-6.70±1.93D的相對近視，眼軸延長了1.53±0.31mm，前后變化差異有顯著意義（p<0.05）。
　　 2細胞培養(yǎng)及鑒定結果：豚鼠RPE細胞培養(yǎng)后2-3天開始有細胞貼壁生長，1周左右匯合，

4、免疫細胞化學鑒定為RPE細胞。
　　 3免疫細胞化學研究結果：HGF在RPE細胞中的表達定位于細胞漿，細胞核無著色。LIM組前部和后極部表達多呈棕黃色，為+++；SC組前部和后極部表達多淺黃色，為+；LIM組和SC組各組自身前部及后極部比較，無顯著性差異（p>0.05）；LIM組RPE細胞前部和后極部的HGF的陽性表達率都明顯高于SC組的前部和后極部，且有顯著性差異（p<0.05）。
　　 4逆轉錄-多聚酶鏈反應（RT-

5、PCR）結果：LIM組與SC組RPE細胞HGFmRNA均有表達。LIM組與SC組各組自身前部及后極部HGFmRNA表達無顯著性差異（p>0.05）；LIM組前部和后極部HGFmRNA表達明顯高于SC組，且有顯著性差異（p<0.05）。
　　 5激光掃描共聚焦顯微鏡（LSCM）檢測結果：LIM組與SC組RPE細胞均有鈣熒光。LIM組前部及后極部鈣離子的濃度明顯高于SC組，且有顯著性差異（p<0.05），而LIM組和SC組前部鈣離子

6、的濃度與后極部比較，差異無顯著意義（p>0.05）。
　　 結論：凹透鏡誘導可以引起明顯的軸性近視；體外培養(yǎng)的豚鼠RPE細胞穩(wěn)定表達HGF。LIM組RPE細胞中前部和后極部HGF及HGFmRNA的表達均明顯高于SC組。說明透鏡誘導豚鼠實驗性近視眼RPE細胞中HGF無論在轉錄水平還是在蛋白表達上都增高，HGF在實驗性近視眼RPE細胞中的活性升高，HGF通過間接方式參與實驗性近視眼的形成。
　　 LIM組與SC組RPE細胞均