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1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文反義RNA抑制人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞VEGF分泌的實(shí)驗(yàn)研究姓名:樊瑩申請學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):眼科學(xué)指導(dǎo)教師:張皙2001.5.1AntisenseRNAInhibittheSecretionofVascularEndothelialGrowthFactorinHumanRetinalPigmentEpithelialCellsAbstractRetinalneovascuIarizalioniSthemostcommo
2、ncauseofvisuaIlossintheworldtodayButunfortunately,forthisfataIdisorder,currentlyavailabletherapeuticproceduresarenotoptimalAnewkindofnOndestructivemannerwouldhavesignificanttherapeuticimplicationsUntilthesedays,investiga
3、tionhaveprovidedthatvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)appearstobeamajormediatorofischemia—inducedocularneOVascuIarIzatlOnFrOmaclinicaIstandpointinhibitionofthesecretionofVEGFmaybeapotentiaItherapeutictargetfortheneOva
4、scularlzatlOnForthispurpose,weprobedintothefeasibilityofusinganantisenseRNAsequenceofhumanVEGFtosuppressthesecretionofthisproteinintargetcellsHVEGFl65andhVEGFl21cDNAswereamplifiedbyreverse—transcriptionPCR(RT—PCR)frOmfet
5、alhumankidneytissueandtheninsertedintotheexpressionplasmidpCR31separatelytoconstructtherecombinedplasmidsthatencodingVEGFl21orVEGFl65cDNAinanantisenseorientationThehumanretinalpigmentepithelialcells(RPE)andhumanumbilicve
6、inendotheliaIcells(HUVEC)werelransfectedwiththeseplasmidsmediatedbyliposomeSelectthestablecelIlinesThetransfectedcellswererepresentedjustastheirparentalcellsexceptforthedifferenceinsomeorganellesassociatedwiththeproteins
7、ecretionfunctionThegrowthratesofthetransfectedHUVECcellswerechangedwiththelevelofitssecretionVEGFproteinIdentifiedthepotentialfunctionoftheserecombinantsininhibitingthesecretionofVEGFintargetcellsanddownregulatingthegrow
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