光動力學(xué)聯(lián)合5-FU緩釋劑治療兔口腔Vx-2腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 1.建立一種操作更加簡單、成活率高、生物相似性高的口腔鱗狀細(xì)胞癌動物模型，為口腔腫瘤實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)； 2.采用光動力學(xué)療法(photodynamic therapy,PDT)聯(lián)合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)緩釋劑治療口腔鱗癌，研究其在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡中是否具有協(xié)同和強(qiáng)化作用。 方法： 采用局部植入瘤塊法建立100只兔Vx-2口腔鱗癌動物模型，成功后隨機(jī)分為5組：A組，空

2、白對照組；B組，靜脈給藥組；C組，緩釋劑組；D組，PDT組：E組，緩釋劑聯(lián)合PDT組。A組：不予任何處理：B組：全麻后耳緣靜脈注射2.5mg/ml氟尿嘧啶溶液30ml(75mg),注射速度控制為0.5ml/min;C組：將5-FU緩釋劑用專用植藥針按時(shí)鐘4個(gè)位點(diǎn)植入到腫瘤中，單點(diǎn)給藥不超過20mg，總劑量為75mg：D組：先從耳緣靜脈注入稀釋為1mg/ml的HPD0.3mg/kg，避光養(yǎng)殖24h后麻醉。照射時(shí)術(shù)區(qū)外用生理鹽水紗布覆蓋保護(hù)

3、，光纖末端距離腫瘤約2cm，波長630nm，光斑覆蓋腫瘤，激光功率密度為200mW/cm3，照射10min，能量密度為100J/cm2；E組：先局部植入5-FU緩釋劑(方法劑量同C組)然后予以激光照射，照射前24h靜脈注射HPD。接下來對各實(shí)驗(yàn)組兔子精神、飲食、活動等行為學(xué)進(jìn)行觀察，連續(xù)五周測量腫瘤體積，五周后處死動物取腫瘤組織做組織學(xué)觀察和免疫組化、流式細(xì)胞儀等來評價(jià)腫瘤抑瘤率、生長狀態(tài)、腫瘤細(xì)胞的凋亡率及腫瘤組織中p53基因蛋白表達(dá)

4、情況來初步研究PDT聯(lián)合5-FU緩釋劑的療效，各組數(shù)據(jù)比較用SPSSl1.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P<0.05為具有顯著性差異。 結(jié)果: 1.Vx-2腫瘤移植成功率較高，成瘤率百分之百，操作簡單，具有可重復(fù)性。 2.治療后連續(xù)觀察五周并測腫瘤體積，發(fā)現(xiàn)治療后第1周各組間腫瘤體積無明顯差異，第2周起空白對照組、靜脈給藥組和PDT組腫瘤生長較緩釋劑組和聯(lián)合治療組較快。聯(lián)合治療組兔子精神狀態(tài)、飲食、活動等均較其他各組

5、稍顯優(yōu)勢。 3.治療后第五周觀察并計(jì)算抑瘤率得：靜脈給藥組(39.9±15.9)％；緩釋劑組(73.8±22.3)％；PDT組(50.6±21.8)％；聯(lián)合治療組(93.6±19.5)％，聯(lián)合治療組抑瘤率明顯低于其他各組，與其他各組間比較具有顯著性差異(P<0.05)。 4.HE染色鏡下觀察腫瘤組織為鱗狀細(xì)胞癌，聯(lián)合治療組較其他組腫瘤細(xì)胞增殖能力下降、核分裂像罕見、細(xì)胞大量死亡或凋亡、出現(xiàn)空泡樣變、核固縮等現(xiàn)象。

6、 5.免疫組化測得各組p53基因蛋白陽性表達(dá)率為：空白對照組(60％)、靜脈給藥組(50％)、緩釋劑組(30％)、PDT組(45％)、聯(lián)合組(15％)，聯(lián)合組明顯低于其他組，各組間比較具有顯著性差異(P<0.05)。 6.流式細(xì)胞儀檢測腫瘤細(xì)胞凋亡率結(jié)果：空白對照組(5.05±1.19)％、靜脈給藥組(11.81±0.89)％、緩釋劑組(25.80±13.78)％、PDT組(20.32±11.24)％、聯(lián)合組(32.51±15.

7、32)％，聯(lián)合組明顯高于其他各組，與其他組間比較具有顯著性差異(P<0.05)，緩釋劑組高于靜脈給藥組及空白對照組，組間比較均具有顯著性差異(P<0.05)，PDT組與空白對照組和靜脈給藥組比較具有顯著性差異(P<0.05)，而緩釋劑組與PDT組比較則無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論: 采用Vx-2腫瘤組織塊移植法建立口腔鱗狀細(xì)胞癌操作簡單，成活率高，是一種較好的可供口腔腫瘤實(shí)驗(yàn)研究的動物模型。在口腔鱗癌治療上5-F