沙利度胺對(duì)腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞輻射敏感性的影響及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:腦膠質(zhì)瘤占原發(fā)性腦腫瘤的50％左右，臨床治療效果不佳，主要治療手段為手術(shù)治療，但膠質(zhì)瘤多呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，手術(shù)難以徹底清除。除此之外，腦膠質(zhì)瘤對(duì)放射敏感性較低，化療易產(chǎn)生耐藥性，因此多種治療方案的聯(lián)合應(yīng)用是研究的重點(diǎn)。VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor)是一種具有信號(hào)肽結(jié)構(gòu)的糖蛋白，其表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展及惡性程度呈正相關(guān)。Cyclin B1是G2/M期調(diào)控點(diǎn)重要調(diào)控蛋白，對(duì)細(xì)胞增殖起

2、著重要的調(diào)控作用，同樣在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中高度表達(dá)，引起惡性增殖。沙利度胺(酞胺哌啶酮thalidomide)屬于非巴比妥類藥物，最早作為鎮(zhèn)靜止吐藥物用于臨床，后發(fā)現(xiàn)具有嚴(yán)重的致畸作用而被禁用。在研究沙利度胺致畸作用時(shí)，發(fā)現(xiàn)能抑制VEGF的表達(dá)，進(jìn)而抑制血管生成，對(duì)抗腫瘤增生和轉(zhuǎn)移有重要價(jià)值。本課題的目的通過研究沙利度胺對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖抑制作用；沙利度胺對(duì)細(xì)胞輻射敏感性的影響；沙利度胺對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞VEGF mRNA和蛋白表達(dá)以及細(xì)胞周期進(jìn)程

3、的影響；探討沙利度胺抑制膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖和增強(qiáng)細(xì)胞輻射敏感性的機(jī)制。
　　 方法:采用MTT法檢測(cè)沙利度胺對(duì)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞存活率的影響；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察沙利度胺抑制U251細(xì)胞的浸潤(rùn)能力；細(xì)胞克隆形成法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞增殖活性變化的影響；H3-TdR摻入法研究沙利度胺單用及聯(lián)合X射線照射對(duì)U251細(xì)胞DNA合成抑制作用；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)VEGF mRNA的相對(duì)表達(dá)水平；流式細(xì)胞儀檢測(cè)沙利度胺聯(lián)合X線

4、照射對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)程的影響；Western blot分析VEGF和Cyclin B1蛋白表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:①M(fèi)TT檢測(cè)分析顯示:沙利度胺對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖抑制作用隨著濃度的增高和時(shí)間的延長(zhǎng)而緩慢增加。②細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察對(duì)照組細(xì)胞48h幾乎長(zhǎng)滿中間的空白區(qū)域，沙利度胺處理組，48h隨著濃度的增加細(xì)胞向中間空白區(qū)域侵潤(rùn)生長(zhǎng)能力逐漸減弱。③照射劑量與沙利度胺濃度對(duì)細(xì)胞的克隆形成存在交互作用(p<0.01)。當(dāng)細(xì)胞存活率為50％時(shí)，

5、100μg/ml沙利度胺的輻射增敏系數(shù)為1.51。④沙利度胺濃度為100μg/ml時(shí)，3H-TdR摻入率為92.11％，聯(lián)合4GyX線照射后3H-TdR摻入率為73.71％。⑤沙利度胺可以抑制VEGF mRNA的表達(dá)，隨著沙利度胺濃度的增加，VEGF mRNA表達(dá)量減少，聯(lián)合X線照射，減少更明顯。⑥低劑量輻射在24h內(nèi)可以誘導(dǎo)VEGF蛋白的表達(dá)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)減少；輻射誘導(dǎo)周期蛋白CyclinB1表達(dá)增加，聯(lián)用沙利度胺后Cyclin

6、B1蛋白表達(dá)減少。⑦流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果顯示，不同時(shí)間處于Go/G1期的細(xì)胞增多，但無顯著性差異。
　　 結(jié)論:①沙利度胺對(duì)腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞屬低細(xì)胞毒性藥物。②沙利度胺抑制膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞DNA合成。③一定濃度的沙利度胺對(duì)細(xì)胞增殖和克隆形成有輻射增敏作用。④沙利度胺對(duì)VEGF mRNA表達(dá)有明顯的抑制作用。Western blot檢測(cè)分析結(jié)果顯示:24h內(nèi)低劑量輻射可以誘導(dǎo)VEGF蛋白的表達(dá)，為臨床膠質(zhì)瘤的治療提供理