甘草酸對人膠質(zhì)瘤U251細胞的作用及其機制的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學2 0 1 1 級碩士學位論文甘草酸對人膠質(zhì)瘤0 2 5 1 細胞的作用及其機制的研究T h e E f f e c ta n d M e c h a n i s m o f G l y c y r r h i z i ca c i do n h u m a ng l i o m a U 2 5 1 c e l l s課題來源： 自選課題學位申請人導師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院答辯委員會主席答辯委員會委員李松杭春華

2、教授外科學( 神經(jīng)外科)學術型碩士研究生第一臨床醫(yī)學院于如同教授邱永明教授梁維邦教授高覺明教授馬馳原教授2 0 1 4 年5 月 日 廣州摘要多種腫瘤細胞中持續(xù)激活。在所有時期的星形細胞瘤細胞及高級別的星形細胞瘤中均能檢測到活化的N F —K B 。且在復發(fā)的膠質(zhì)瘤細胞中，N F - K B 的活化水平明顯高于原發(fā)的膠質(zhì)瘤，提示N F - KB 可能與膠質(zhì)瘤復發(fā)相關。更重要的是，活化的N F - K B 能夠激活多種基因的轉(zhuǎn)錄，包括編碼

3、細胞因子和粘附因子的基因，及決定腫瘤發(fā)生和發(fā)展的基因。N F - KB 活化主要是通過p 5 0 ／p 6 5 亞基組成的二聚體脫離與抑制性K B 蛋白的結(jié)合，并轉(zhuǎn)移到細胞核內(nèi)實現(xiàn)。F a s —L 、I F N —B 、I L 一8 和I P - I O 基因的啟動子及H I V - I 基因的增強子是N F - K B 最常見的D N A 結(jié)合位點。核轉(zhuǎn)錄因子N F - KB 與膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移、復發(fā)、凋亡、免疫應答等

4、密切相關，并且甘草酸能通過下調(diào)P 6 5 的表達誘導前列腺癌細胞系凋亡。因此，我們研究甘草酸處理U 2 5 1 細胞后N F —K B 活性亞基p 6 5 蛋白在細胞核中的改變。目的：觀察甘草酸( G l y c y r r h i z i c a c i d ，G A ) 對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U 2 5 1 細胞增殖和凋亡的影響，并通過檢測N F - KB 活性亞基p 6 5 在細胞核內(nèi)表達的變化，探討甘草酸抑制膠質(zhì)瘤增殖的可能機制，為進一

5、步研究甘草酸治療膠質(zhì)瘤提供理論基礎和實驗依據(jù)。方法：1 、細胞培養(yǎng)：人膠質(zhì)瘤母細胞系U 2 5 1 復蘇后在含1 0 ％H 臺牛血清( F e t a lb o v i n es e r u m ，F(xiàn) B S ) 的D M E M 培養(yǎng)基中于3 7 。C 、5 ％C 0 ：培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天換液，3 —4 天傳代一次，用于實驗的細胞均處于對數(shù)生長期。2 、C C K 一8 法檢測細胞生存率：取對數(shù)生長期的細胞，胰酶消化后混懸，細胞計數(shù)板

6、計數(shù)后，接種于9 6 孔板，每孑L l O O u l ，含3 X 1 0 3 個細胞。待細胞貼壁后，將細胞培養(yǎng)液更換為空白對照液和不同濃度的甘草酸溶液，各實驗組甘草酸濃度為1 、2 、4 m m o l ／L ，每組3 個復孔，置于3 7 。C 、5 ％C 0 ：培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)2 4 、4 8 、7 2h 更換為D M E M 培養(yǎng)基，同時每孔加入1 0 ul C C K - 8 溶液，恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2 h ，用全自動酶標