甘草酸對(duì)人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2 0 1 1 級(jí)碩士學(xué)位論文甘草酸對(duì)人膠質(zhì)瘤0 2 5 1 細(xì)胞的作用及其機(jī)制的研究T h e E f f e c ta n d M e c h a n i s m o f G l y c y r r h i z i ca c i do n h u m a ng l i o m a U 2 5 1 c e l l s課題來(lái)源： 自選課題學(xué)位申請(qǐng)人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)委員李松杭春華

2、教授外科學(xué)( 神經(jīng)外科)學(xué)術(shù)型碩士研究生第一臨床醫(yī)學(xué)院于如同教授邱永明教授梁維邦教授高覺(jué)明教授馬馳原教授2 0 1 4 年5 月 日 廣州摘要多種腫瘤細(xì)胞中持續(xù)激活。在所有時(shí)期的星形細(xì)胞瘤細(xì)胞及高級(jí)別的星形細(xì)胞瘤中均能檢測(cè)到活化的N F —K B 。且在復(fù)發(fā)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，N F - K B 的活化水平明顯高于原發(fā)的膠質(zhì)瘤，提示N F - KB 可能與膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)相關(guān)。更重要的是，活化的N F - K B 能夠激活多種基因的轉(zhuǎn)錄，包括編碼

3、細(xì)胞因子和粘附因子的基因，及決定腫瘤發(fā)生和發(fā)展的基因。N F - KB 活化主要是通過(guò)p 5 0 ／p 6 5 亞基組成的二聚體脫離與抑制性K B 蛋白的結(jié)合，并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)實(shí)現(xiàn)。F a s —L 、I F N —B 、I L 一8 和I P - I O 基因的啟動(dòng)子及H I V - I 基因的增強(qiáng)子是N F - K B 最常見的D N A 結(jié)合位點(diǎn)。核轉(zhuǎn)錄因子N F - KB 與膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、凋亡、免疫應(yīng)答等

4、密切相關(guān)，并且甘草酸能通過(guò)下調(diào)P 6 5 的表達(dá)誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞系凋亡。因此，我們研究甘草酸處理U 2 5 1 細(xì)胞后N F —K B 活性亞基p 6 5 蛋白在細(xì)胞核中的改變。目的：觀察甘草酸( G l y c y r r h i z i c a c i d ，G A ) 對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U 2 5 1 細(xì)胞增殖和凋亡的影響，并通過(guò)檢測(cè)N F - KB 活性亞基p 6 5 在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)的變化，探討甘草酸抑制膠質(zhì)瘤增殖的可能機(jī)制，為進(jìn)一

5、步研究甘草酸治療膠質(zhì)瘤提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：1 、細(xì)胞培養(yǎng)：人膠質(zhì)瘤母細(xì)胞系U 2 5 1 復(fù)蘇后在含1 0 ％H 臺(tái)牛血清( F e t a lb o v i n es e r u m ，F(xiàn) B S ) 的D M E M 培養(yǎng)基中于3 7 。C 、5 ％C 0 ：培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天換液，3 —4 天傳代一次，用于實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞均處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。2 、C C K 一8 法檢測(cè)細(xì)胞生存率：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，胰酶消化后混懸，細(xì)胞計(jì)數(shù)板

6、計(jì)數(shù)后，接種于9 6 孔板，每孑L l O O u l ，含3 X 1 0 3 個(gè)細(xì)胞。待細(xì)胞貼壁后，將細(xì)胞培養(yǎng)液更換為空白對(duì)照液和不同濃度的甘草酸溶液，各實(shí)驗(yàn)組甘草酸濃度為1 、2 、4 m m o l ／L ，每組3 個(gè)復(fù)孔，置于3 7 。C 、5 ％C 0 ：培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)2 4 、4 8 、7 2h 更換為D M E M 培養(yǎng)基，同時(shí)每孔加入1 0 ul C C K - 8 溶液，恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2 h ，用全自動(dòng)酶標(biāo)