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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:觀察miR-195在人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞及其耐藥株中的表達(dá)情況,初步探討miR-195在膠質(zhì)瘤耐藥形成及逆轉(zhuǎn)中的作用機(jī)制。
方法:采用替莫唑胺(TMZ)濃度遞增的作用方式進(jìn)行誘導(dǎo),初始誘導(dǎo)劑量TMZ0.25μg/mL,最高誘導(dǎo)劑量為20μg/mL,獲得穩(wěn)定的對(duì)TMZ耐藥的U251細(xì)胞,命名為U251R或耐藥組細(xì)胞,用CCK-8法檢測(cè)U251,U251R的細(xì)胞增殖抑制率,計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50,耐藥指數(shù)(RF);q
2、RT-PCR技術(shù)檢測(cè)U251和U251R細(xì)胞中miR-195的表達(dá)情況;用脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法將miR-195-mimics轉(zhuǎn)入U(xiǎn)251R,稱為轉(zhuǎn)染組細(xì)胞,熒光顯微鏡檢測(cè)轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染效率,qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)耐藥組,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中miR-195的表達(dá)情況;CCK-8法檢測(cè)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖抑制率,計(jì)算IC50,RF;流式細(xì)胞儀檢測(cè)耐藥組,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡率。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,應(yīng)用SPSS19.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。多組
3、間均數(shù)比較使用單因素方差分析,各組間兩兩比較使用LSD-t檢驗(yàn)。IC50用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件包的Probit過(guò)程求解。P<0.05定為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
結(jié)果:
1、歷經(jīng)6個(gè)月成功建立了對(duì)TMZ耐藥的U251R,U251R細(xì)胞IC50(310.86μM)是未經(jīng)誘導(dǎo)U251細(xì)胞IC50(32.46μM)的9.58倍(P<0.05),其耐藥指數(shù)(RF)約為10;
2、qRT-PCR顯示耐藥株U25
4、1R中miR-195相對(duì)表達(dá)量低于U251(P<0.05),轉(zhuǎn)染組中miR-195相對(duì)表達(dá)量高于耐藥組(P<0.05);
3、轉(zhuǎn)染組miR-195-mimics的轉(zhuǎn)染效率在90%以上;
4、轉(zhuǎn)染組細(xì)胞IC50(162.97μM)是未經(jīng)誘導(dǎo)U251細(xì)胞IC50(32.46μM)的5.02倍(P<0.05),其耐藥指數(shù)(RF)約為5;
5、流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染組較耐藥組細(xì)胞凋亡率增多(P<0.0
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