NEDD4-1對(duì)腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞遷移和侵襲性作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 檢測(cè)NEDD4-1對(duì)腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞遷移和侵襲性的影響，為膠質(zhì)瘤的抗侵襲性治療提供理論基礎(chǔ)。 方法: 依據(jù)靶基因序列設(shè)計(jì)siRNA，克隆入pGPU6/GFP/Neo載體U6啟動(dòng)子的下游，建立shRNA表達(dá)質(zhì)粒系統(tǒng)，酶切、測(cè)序鑒定正確后擴(kuò)增質(zhì)粒。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法分別將pcDNA3.1-NEDD4-1、pGPU6/GFP/Neo-NEDD4-1 shRNA及陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞，經(jīng)G418篩選，獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

2、細(xì)胞株。采用RT-PCR、Western Blot分別檢測(cè)NEDD4-1 mRNA水平及其蛋白含量，鑒定轉(zhuǎn)染細(xì)胞。利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力。 結(jié)果: 1.成功構(gòu)建NEDD4-1 shRNA表達(dá)質(zhì)粒，經(jīng)酶切鑒定、測(cè)序分析，序列完全正確。 2.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后，與空白對(duì)照組相比，NEDD4-1組目的基因mRNA水平及蛋白含量明顯增加(P<0.05)，而NEDD4-1干擾組目的基

3、因mRNA水平及蛋白含量明顯減少(P<0.05)。 3.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組相比，NEDD4-1組遷移能力增加58.19％，侵襲能力增加56.82％；NEDD4-1干擾組遷移能力下降55.86％，侵襲能力下降51.54％。 結(jié)論: NEDD4-1能夠促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的遷移和侵襲。抑制NEDD4-1的表達(dá)可以有效的降低腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的遷移和侵襲能力，NEDD4-1