快速老化小鼠耳蝸NGF的表達分布和增齡性變化、以及pcDNA3-β-NGF的構(gòu)建.pdf

1、目的:研究神經(jīng)生長因子(nerve growth factor, NGF)在小鼠耳蝸中的表達分布、以及年齡相關(guān)性變化特點,構(gòu)建真核表達載體pcDNA3-β-NGF,為老年性耳聾的 NGF基因治療提供支持。
　　方法:選取5、7月齡的快速老化小鼠亞系8(Senescence accelerated dementia mouse/prone, SAMP8)作為實驗組,而同齡抗快速老化小鼠亞系1(Senescence accelerat

2、ed mouse/resistance1, SAMR1)作為 SAMP8的正常對照組;應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法分別觀察其耳蝸中神經(jīng)生長因子(NGF)的表達分布情況、以及增齡性變化特點。取胎腦組織50g,提取RNA,經(jīng)RT-PCR、XhoI和HindIII雙酶切及T4連接酶連接構(gòu)建真核表達載體 pcDNA3-β-NGF。
　　結(jié)果:1、NGF在小鼠耳蝸的表達分布、以年齡相關(guān)性變化特點:在小鼠耳蝸中,神經(jīng)生長因子在螺旋神經(jīng)節(jié)細胞、內(nèi)外

3、毛細胞、聽神經(jīng)纖維及血管紋中均有表達,且螺旋神經(jīng)節(jié)細胞、以及內(nèi)外毛細胞為主要表達部位。耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細胞、以及內(nèi)外毛細胞NGF免疫組化染色平均光密度值:耳蝸NGF免疫組化染色圖象分析,與對照組比較,第5、7月齡SAMP8小鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細胞、以及毛細胞中的NGF蛋白表達較同齡SAMR1小鼠明顯降低(P<0.05);各組小鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細胞 NGF免疫組化染色平均光密度值分別為:5月齡實驗組 S A M P8小鼠:0.281±0.00

4、5,5月齡對照組 SAMR1小鼠:0.420±0.039,7月齡實驗組 S A M P8小鼠:0.220±0.008,7月齡對照組SAMR1小鼠:0.342±0.017。7月齡SAMP8與5月齡SAMP8進行組內(nèi)比較P<0.01;7月齡SAMP8與7月齡SAMR1進行組間比較p<0.01;5月齡SAMP8與5月齡SAMR1進行組間比較P<0.01有顯著性差異。各組小鼠耳蝸毛細胞 NGF免疫組化染色平均光密度值分別為:5月齡實驗組 S A

5、 M P8小鼠:0.291±0.007,5月齡對照組SAMR1小鼠:0.410±0.011,7月齡實驗組 S A M P8小鼠:0.213±0.009,7月齡對照組SAMR1小鼠:0.334±0.012。7月齡SAMP8與5月齡SAMP8進行組內(nèi)比較P<0.01;7月齡SAMP8與7月齡SAMR1進行組間比較P<0.01;5月齡SAMP8與5月齡SAMR1進行組間比較P<0.01有顯著性差異。
　　2、真核表達載體pcDNA3-β