快速老化癡呆小鼠智力、聽功能、以及耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞MeCP2的増齡性變化.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)旨在探討快速老化癡呆小鼠( Senescence accelerated dementia mouse/prone, SAMP8)的聽功能、智力及耳蝸( Cochlea)組織中 MeCP2表達(dá)的增齡性變化特點(diǎn)。
　　方法:選用5、7月齡的 SAMP8小鼠作為實(shí)驗(yàn)組,同齡的抗快速老化小鼠亞系1( Senescence accelerated mouse/resistance1,SAMR1)作為對(duì)照組。分別對(duì)各組小鼠采用

2、Y型電迷宮及8kHz短純音聽性腦干反應(yīng)( auditory brainstem response,ABR)檢測其智力、雙耳聽功能( ABR閾值)、耳蝸基底膜鋪片硝酸銀染色毛細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)算左側(cè)耳蝸底回外毛細(xì)胞平均缺失率、應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測不同月齡組小鼠右側(cè)耳蝸中組織中 MeCP2蛋白的表達(dá)與分布情況。
　　結(jié)果:1、智力檢測:實(shí)驗(yàn)組5月齡 SAMP8小鼠第一天的學(xué)習(xí)成績(達(dá)標(biāo)次數(shù)、錯(cuò)誤次數(shù)、全天總反應(yīng)時(shí)間)分別為:8.57±

3、5.97(次)、3.43±1.13(次)、48.47±15.82(s);實(shí)驗(yàn)組5月齡 SAMP8小鼠第二天的記憶成績(達(dá)標(biāo)次數(shù)、錯(cuò)誤次數(shù)、全天總反應(yīng)時(shí)間)分別為:5.14±3.33(次)、2.71±0.76(次)、46.19±11.63(s)。實(shí)驗(yàn)組7月齡 SAMP8小鼠第一天的學(xué)習(xí)成績(達(dá)標(biāo)次數(shù)、錯(cuò)誤次數(shù)、全天總反應(yīng)時(shí)間)分別為:15.3±6.58(次)、5.20±1.03(次)、73.09±22.56(s);實(shí)驗(yàn)組7月齡 SAMP8

4、小鼠第二天的記憶成績(達(dá)標(biāo)次數(shù)、錯(cuò)誤次數(shù)、全天總反應(yīng)時(shí)間)分別為:11.2±2.39(次)、3.60±0.84(次)、60.05±12.85(s)。對(duì)照組5月齡SAMR1小鼠第一天的學(xué)習(xí)成績(達(dá)標(biāo)次數(shù)、錯(cuò)誤次數(shù)、全天總反應(yīng)時(shí)間)分別為:7.29±2.29(次)、1.57±0.53(次)、46.87±11.44(s)。對(duì)照組5月齡SAMR1小鼠第二天的記憶成績(達(dá)標(biāo)次數(shù)、錯(cuò)誤次數(shù)、全天總反應(yīng)時(shí)間)分別為:3.57±1.51(次)、0.86

5、±0.38(次)、35.16±7.51(s)。對(duì)照組7月齡SAMR1小鼠第一天的學(xué)習(xí)成績(達(dá)標(biāo)次數(shù)、錯(cuò)誤次數(shù)、全天總反應(yīng)時(shí)間)分別為:8.17±2.99(次)、2.83±1.17(次)、52.57±13.79(s)。對(duì)照組7月齡SAMR1小鼠第二天的記憶成績(達(dá)標(biāo)次數(shù)、錯(cuò)誤次數(shù)、全天總反應(yīng)時(shí)間)分別為:7.67±2.50(次)、1.83±0.75(次)、44.28±11.31(s)。組間比較,實(shí)驗(yàn)組7月齡SAMP8小鼠與對(duì)照組7月齡SA

6、MR1小鼠相比達(dá)標(biāo)次數(shù)和錯(cuò)誤次數(shù)增多,全天總反應(yīng)時(shí)間延長,差異顯著(P<0.05);組內(nèi)比較,實(shí)驗(yàn)組7月齡SAMP8小鼠較5月齡SAMP8小鼠達(dá)標(biāo)次數(shù)和錯(cuò)誤次數(shù)增多,全天總反應(yīng)時(shí)間延長,差異顯著(P<0.05)。
　　2、聽功能檢測:實(shí)驗(yàn)組5、7月齡SAMP8小鼠的左耳ABR閾值( dB SPL)分別為49.3±3.59、55.1±5.09;對(duì)照組5、7月齡SAMR1小鼠的左耳ABR閾值( dB SPL)分別為34.5±5.58、

7、46.7±5.47。實(shí)驗(yàn)組5、7月齡SAMP8小鼠的右耳ABR閾值( dB SPL)分別為46.1±3.53、56.3±6.17;對(duì)照組5、7月齡SAMR1小鼠的右耳ABR閾值( dB SPL)分別為37.5±6.72、47.3±2.07。組間比較,實(shí)驗(yàn)組7月齡SAMP8小鼠與對(duì)照組7月齡SAMR1小鼠雙耳ABR閾值差異顯著(P<0.01);實(shí)驗(yàn)組5月齡SAMP8小鼠與對(duì)照組5月齡SAMR1小鼠雙耳ABR閾值差異顯著(P<0.01);組

8、內(nèi)比較,實(shí)驗(yàn)組5、7月齡SAMP8小鼠雙耳ABR閾值差異顯著(P<0.05)。
　　3、耳蝸毛細(xì)胞改變:耳蝸基底膜鋪片光學(xué)顯微鏡下觀察,與對(duì)照組比較,隨著月齡的增加,實(shí)驗(yàn)組 SAMP8小鼠耳蝸底回外毛細(xì)胞缺失加重;各組小鼠耳蝸底回外毛細(xì)胞平均缺失率(％)分別為:5月齡實(shí)驗(yàn)組SAMP8小鼠2.4±1.73、5月齡對(duì)照組 SAMR1小鼠1.53±1.21;7月齡實(shí)驗(yàn)組 SAMP8小鼠12.8±3.63、7月齡對(duì)照組SAMR1小鼠2.5

9、1±2.2。組間比較,實(shí)驗(yàn)組7月齡SAMP8小鼠與對(duì)照組7月齡SAMR1小鼠耳蝸底回外毛細(xì)胞平均缺失率差異顯著(P<0.01);組內(nèi)比較,實(shí)驗(yàn)組5、7月齡SAMP8小鼠耳蝸底回外毛細(xì)胞平均缺失率差異顯著(P<0.01)。
　　4、耳蝸 MeCP2免疫組化染色:耳蝸 MeCP2免疫組化染色鏡下觀察,與對(duì)照組比較,隨著月齡的增加,實(shí)驗(yàn)組SAMP8小鼠耳蝸 MeCP2免疫組化染色平均光密度值降低;各組小鼠耳蝸 MeCP2免疫組化染色平均

10、光密度值分別為:5月齡實(shí)驗(yàn)組 SAMP8小鼠38.43±12.37、5月齡對(duì)照組 SAMR1小鼠43.11±10.18;7月齡實(shí)驗(yàn)組SAMP8小鼠27.26±4.61、7月齡對(duì)照組SAMR1小鼠42.23±9.37。組間比較,實(shí)驗(yàn)組7月齡SAMP8小鼠與對(duì)照組7月齡SAMR1小鼠相比,耳蝸 MeCP2免疫組化染色平均光密度值明顯降低,差異顯著(P<0.01);組內(nèi)比較,實(shí)驗(yàn)組7月齡SAMP8小鼠較5月齡SAMP8小鼠耳蝸 MeCP2免疫

11、組化染色平均光密度值降低,差異顯著(P<0.05)。
　　耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞內(nèi) MeCP2免疫組化染色平均光密度值分別為:5月齡實(shí)驗(yàn)組SAMP8小鼠35.69±2.36、5月齡對(duì)照組SAMR1小鼠42.91±5.87;7月齡實(shí)驗(yàn)組SAMP8小鼠30.26±3.54、7月齡對(duì)照組SAMR1小鼠40.78±4.27。組間比較,實(shí)驗(yàn)組7月齡SAMP8小鼠與對(duì)照組7月齡SAMR1小鼠相比,耳蝸 SGNs MeCP2免疫組化染色平均光密度值

12、明顯降低,差異顯著(P<0.01);實(shí)驗(yàn)組5月齡 SAMP8小鼠與對(duì)照組相比,耳蝸 SGNs MeCP2免疫組化染色平均光密度值降低,差異顯著( P<0.05)。組內(nèi)比較,實(shí)驗(yàn)組7月齡SAMP8小鼠較5月齡SAMP8小鼠耳蝸 SGNs MeCP2免疫組化染色平均光密度值降低,差異顯著(P<0.05)。
　　結(jié)論:SAMP8小鼠隨月齡增長出現(xiàn)學(xué)習(xí)和記憶力下降以及聽功能減退、耳蝸毛細(xì)胞缺失加重以及耳蝸 MeCP2免疫組化染色陽性率降低