骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后NO和ET含量影響的研究.pdf

1、蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)是神經(jīng)科常見(jiàn)病之一,其常見(jiàn)并發(fā)癥腦血管痙攣(cerebrovascular spasm,CVS)是導(dǎo)致SAH繼發(fā)性腦缺血改變的重要因素,是SAH患者致死和致殘的重要原因。近年來(lái)雖然對(duì)SAH后CVS的發(fā)生機(jī)制進(jìn)行了廣泛的研究,但確切的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。神經(jīng)遞質(zhì)是決定神經(jīng)系統(tǒng)繼發(fā)性損傷的重要因素。內(nèi)皮素(endothelial,ET)與一氧化氮(nitric oxide

2、,NO)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的腦內(nèi)兩種重要的神經(jīng)遞質(zhì),也是器官局部血流調(diào)節(jié)因子,可能是促發(fā)CVS的重要物質(zhì)。血管內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)釋放ET,收縮血管和促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖,同時(shí)釋放NO松馳血管和抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。正常情況下,ET和NO處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài),維持著腦血管的正常舒縮功能,當(dāng)這兩種血管作用物質(zhì)的平衡被破壞時(shí),便導(dǎo)致血管收縮,引起腦缺血改變。近年來(lái)神經(jīng)干細(xì)胞移植治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病已成為生命科學(xué)研究的熱點(diǎn),為腦出血的治療開(kāi)辟了新的途徑。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

3、(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)具有多向分化潛能,特性穩(wěn)定,連續(xù)傳代和冷凍保存后仍具有多向分化潛能,且來(lái)源豐富,無(wú)倫理學(xué)限制,免疫源性低,具備細(xì)胞移植所需的條件。
　　 目的:本研究擬利用大鼠骨髓中分離培養(yǎng)獲得骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型進(jìn)行移植試驗(yàn),通過(guò)觀察大鼠血液中NO和ET的含量變化,研究BMSCs在出血性腦血管病中可能的治療作用及可行性,為臨床治療提供理論

4、和試驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:選取4-6W齡100-150g健康清潔級(jí)SD大鼠,無(wú)菌條件下取股骨、脛骨,沖洗法采集大鼠骨髓細(xì)胞,貼壁分離法分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,CD34、CD44鑒定,利用含有堿性生長(zhǎng)因子(b-FGF)的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化,BrdU進(jìn)行標(biāo)記。選取300g左右成年健康清潔級(jí)SD大鼠80只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)組、DMEM對(duì)照組和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)移植組,除正常對(duì)照組外,

5、其余3組均采用枕大池二次注血法建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型,DMEM組和BMSCs組在模型建立成功24h后分別注入30μl DMEM培養(yǎng)基和經(jīng)BrdU標(biāo)記48h的BMSCs細(xì)胞懸液。分別在第1、3、7、14d測(cè)量各組血液中NO和ET的含量,相關(guān)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.SAH后1d、3d、7d大鼠血液中NO含量明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.05),14d后恢復(fù)正常水平(P＞0.05)。
　　 2.

6、SAH后1d、3d、7d大鼠血液中ET含量明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05),14d后恢復(fù)正常水平(P＞0.05)。
　　 3.BMSCs移植后,SAH大鼠血液中NO含量下降和ET含量升高的程度較SAH組減輕(P＜0.05),DMEM組和SAH組相比無(wú)明顯改變(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.大鼠SAH后血液中NO和ET含量隨時(shí)間進(jìn)程而變化,可能參與了SAH后腦血管痙攣的過(guò)程。
　　 2.BMS