骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療腦出血的實驗研究.pdf

1、目的: 探討人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(human bone marrow mesenchymal stem cells，hBMSCs)不同途徑移植對腦出血大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。 方法: 1．收集人骨髓細(xì)胞，經(jīng)密度梯度離心法分離、培養(yǎng)hBMSCs，用流式細(xì)胞術(shù)檢測其免疫學(xué)表型，并通過向脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化，來鑒定所得細(xì)胞為間充質(zhì)干細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)三代后用于實驗。 2．采用自體未肝素化新鮮血回注法建立大鼠殼核

2、腦出血模型，取SD雄性大鼠48只，隨機分成5組，A假手術(shù)組(只鉆開顱骨，進(jìn)針5.5mm，不注血，n=8)，B自然恢復(fù)組(只注血，不移植，n=10)，C同側(cè)腦移植組(在血腫周圍移植，n=10)，D尾靜脈移植組(通過尾靜脈移植，n=10)，E蛛網(wǎng)膜下腔移植組(通過枕大池移植，n=10)。 3．將Hoechst33342體外標(biāo)記的BMSCs植入大鼠殼核出血模型，移植前、后用Menzies量表、粘貼片移除感覺實驗(adhesive-re

3、movel somatosensory test)進(jìn)行神經(jīng)功能評價；于移植后14天和28天取腦組織進(jìn)行冰凍切片，用熒光顯微鏡觀察移植細(xì)胞在腦內(nèi)的分布情況。 結(jié)果: 1．密度梯度離心法獲得的細(xì)胞培養(yǎng)兩周后，細(xì)胞呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞樣梭形外觀，形態(tài)均一，免疫熒光標(biāo)記，流式細(xì)胞儀檢測顯示：表達(dá)CD106、CD105、CD29，而不表達(dá)CD34、CD45，經(jīng)誘導(dǎo)可以向脂肪細(xì)胞、神經(jīng)元分化，符合BMSC特征。 2．熒光顯微鏡下同

4、側(cè)腦移植組、蛛網(wǎng)膜下腔移植組、尾靜脈移植組均可見hBMSCs向腦出血周圍組織定向遷移。移植后第2周病灶周圍見大量標(biāo)記陽性細(xì)胞，第4周標(biāo)記陽性細(xì)胞數(shù)量明顯減少。 3．模型制成后1天、3天，移植后1天自然恢復(fù)組及各治療組Menzies量表神經(jīng)功能缺損評分、粘貼片移除感覺實驗結(jié)果統(tǒng)計學(xué)分析無顯著差異(P>0.05)。 4．Menzies量表神經(jīng)功能缺損評分：移植后5天評分，自然恢復(fù)組與各治療組神經(jīng)功能均有不同程度地好轉(zhuǎn)，統(tǒng)計學(xué)

5、分析F=11.65，P<0.05，各組間有顯著差異，兩兩比較，自然恢復(fù)組與同側(cè)腦移植組、蛛網(wǎng)膜下腔移植組間有顯著差異(P<0.05)，與尾靜脈移植組間無顯著差異(P>0.05)；尾靜脈移植組與同側(cè)腦移植組、蛛網(wǎng)膜下腔移植組比較有顯著差異(P<0.05)，同側(cè)腦移植組和蛛網(wǎng)膜下腔移植組間無顯著差異(P>0.05)。移植后14天、28天評分，自然恢復(fù)組與各治療組神經(jīng)功能均進(jìn)一步恢復(fù)，統(tǒng)計學(xué)分析，F(xiàn)=14.37，P<0.05，各組間有顯著差異

6、，兩兩比較，自然恢復(fù)組與各治療組間有顯著差異(P<0.05)，各治療組間無顯著差異(P>0.05)。 5．粘貼片移除實驗結(jié)果：移植后5天，自然恢復(fù)組與各治療組比較有顯著差異(P<0.05)，各治療組間無顯著差異(P>0.05)；假手術(shù)組為8.10±2.15s，與其它各組差異顯著(P<0.01)；移植后14天，自然恢復(fù)組與各治療組潛伏期進(jìn)一步縮短，統(tǒng)計學(xué)分析，各組間存在顯著差異，P<0.05；自然恢復(fù)組與各治療組比較有顯著差異性，

7、P<0.05,同側(cè)腦移植組與蛛網(wǎng)膜下腔移植組比較無顯著差異(P>0.05)。尾靜脈移植組與蛛網(wǎng)膜下腔移植組比較有顯著差異(P<0.05)。移植后28天自然恢復(fù)組與各治療組間仍有顯著差異(P<0.05)各治療組間無顯著差異(P>0.05)。 6．觀察至移植后28天為止，所有移植組動物腦內(nèi)，未發(fā)現(xiàn)腫瘤組織形成。 結(jié)論: 1．人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以透過血腦屏障向病灶周圍組織定向遷移。 2．hBMSCs移植可促進(jìn)