靶向CD4分子的小分子免疫抑制劑的篩選及活性鑒定.pdf

1、同種異體器官(骨髓、腎、肝、胰腺等)移植已成為治療惡性腫瘤或器官衰竭的有效治療手段之一，但移植后的并發(fā)癥如移植物抗宿主病(graft versushost disease，GVHD)仍是影響移植成功率的主要因素之一。研究證明T淋巴細胞及它所介導的免疫應答效應與GVHD的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關系；通過對免疫系統(tǒng)包括T細胞功能的抑制可有效預防或治療GVHD已得到證實。近年來的研究表明CD4<'+>T細胞是啟動移植物排斥反應中最重要的細胞亞群

2、，CD4<'+>T細胞表面CD4分子與MHC-Ⅱ類分子之間的相互作用是CD4<'+>T細胞激活并介導免疫應答反應的關鍵。研制靶向CD4分子的小分子藥物，特異性阻斷由MHC-Ⅱ類分子與CD4<'+>T細胞相互作用所介導的移植排斥反應是目前免疫學和藥學所關注的焦點。 基于CD4分子與MHC-Ⅱ類分子之間相互作用的立體構型的理論分析，李松教授研究組應用計算機虛擬篩選以及分子對接技術從非肽類有機化合物庫中篩選獲得了一組靶向CD4分子D1

3、功能表位的小分子化合物，為本研究課題提供了可用于免疫抑制研究靶向CD4的小分子化合物。本課題擬通過體外生物學試驗從19種化合物中篩選具有免疫抑制作用的小分子化合物，并建立同種異基因骨髓移植動物模型，體內(nèi)進一步評價靶向CD4分子的小分子化合物對GVHD的預防作用。 本課題首先應用表達CD4分子的HPB-ALL細胞(T淋巴白血病細胞系，CD4<'+>陽性率≥90％)和表達MHC-Ⅱ類分子的Datldi細胞(B淋巴白血病細胞系，MHC

4、-Ⅱ類分子陽性率≥90％)、健康人外周血單個核細胞的混合淋巴細胞培養(yǎng)(MLR)方法，對虛擬篩選獲得的19個小分子化合物進行檢測，MTT法結果證實19個化合物中的5個(JK、E4、J4、A5和J2)化合物具確劑量依賴性的免疫抑制作用，外周血MLR<'3>H-TdR摻入法的結果進一步驗證了JK、E4、J4、A5和J2的良好免疫抑制作用。為了進一步驗證具有較好免疫抑制作用的J2化合物對GVHD的預防和治療效應，本課題以近交系C57BL/6(H

5、-2<'b>)小鼠作為供者，BALB/c(H-2<'d>)小鼠作為受者，給予受者鼠8Gy<'60>Co全身照射，4-6小時后進行骨髓細胞與脾細胞移植。通過對受體鼠H-2<'b>基因的檢測、生存周期和器官組織的病理學分析，結果初步證實本課題所建立的異基因骨髓移植動物模型具有急性移植物抗宿主病(aGVHD)的基本特征，可用于對以上小分子化合物預防或治療aGVHD的評價。在此動物模型上觀察了化合物J2口服給藥后對移植后aGVHD的預防和治療作