金雀異黃素對類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞OPG-RANKL-RANK通路的影響.pdf

1、目的:研究金雀異黃素(Gen)對CIA大鼠及人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞（FLS）OPG/RANKL/RANK通路的影響及機制研究。
　　研究對象:CIA大鼠、人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞。
　　方法:將60只SD大鼠隨機分為六組，每組10只，分別為空白對照組、造模組、低劑量金雀異黃素組、中劑量Gen組、高劑量Gen組和甲氨蝶呤(MTX)陽性對照組。造模組和各治療組均采用完全弗氏佐劑和Ⅱ型膠原皮下注射建立CIA模型，于造

2、模次日開始用藥， Gen組每天胃內(nèi)灌注Gen混懸液1ml，低、中、高劑量Gen治療組的Gen濃度分別為50μM、100μM和200μM; MTX陽性對照組也于造模后開始用藥，每周胃內(nèi)灌注MTX懸液1ml，濃度為0.1mg/ml;而空白組和模型對照組每天灌注等量的生理鹽水。所有實驗組大鼠每周進行一次關節(jié)炎指數(shù)（AI）評分及后肢容積測定。第五周對大鼠進行腹主靜脈采血，采取3ml置于血清管中分離出血清后，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測各

3、組大鼠血清中核因子-κB受體活化因子配體(RANKL)及骨保護素(OPG)的水平。
　　培養(yǎng)人類風濕關節(jié)炎FLS，F(xiàn)LS培養(yǎng)至3代后進行試驗。試驗共分為四組:空白對照組、TNFα組、TNFα+Gen組及Gen組，免疫印跡(Western Blot)檢測Gen作用人FLS細胞RANK、RANKL、OPG、雌激素受體(ERα)表達情況，免疫熒光檢測ERα細胞內(nèi)分布情況。
　　結果:
　　1、骨代謝因子RANKL在模型組大鼠

4、血清中表達量的顯著高于空白對照組;Gen能下調(diào)RANKL的分泌，中、高劑量Gen對RNAKL的抑制作用與MTX相當。模型組大鼠血清中的細胞因子OPG的表達水平低于空白對照組;Gen能上調(diào)OPG的分泌。中、高劑量Gen對OPG的上調(diào)作用與MTX相當。
　　2、Western Blotting結果顯示:Gen可以上調(diào)人RA-FLS中OPG、RANKL，對OPG上調(diào)作用更強，Gen組OPG/RANKL增高;但Gen對RANK表達無明顯影

5、響。
　　3、Western Blotting結果顯示:Gen對ERα表達無明顯影響;此外，免疫熒光結果顯示:與對照組比較，Gen組ERα核內(nèi)明顯增高。
　　結論:
　　1、體內(nèi)試驗結果提示，Gen能夠影響CIA大鼠血清中RANKL、OPG水平，同時對OPG/RANKL比值有影響，提示Gen可能通過RANKL/OPG/RNAK通路抑制RA骨質破壞。
　　2、Gen上調(diào)人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞RANKL、OP