PVL新生大鼠腦組織ephrin—B3mRNA表達及神經(jīng)細胞凋亡變化.pdf

1、目的: 1．建立新生大鼠腦室周圍白質(zhì)軟化(pcriventricular leukomalacia，PVL)模型，觀察新生大鼠PVL時腦組織病理學改變。 2．研究正常新生大鼠和PVL大鼠不同時間點腦組織ephrin-B3mRNA的表達變化，以及神經(jīng)細胞凋亡的變化。 3．探討ephrin-B3與神經(jīng)細胞凋亡的關(guān)系。 4．探討ephrin-B3在PVL損傷及CNS神經(jīng)再生抑制機制中的意義。 方法:

2、 160只2日齡新生SD大鼠，隨機分為2組，實驗組(PVL組)86只，對照組(假手術(shù)組)74只，缺氧缺血(Hypoxic-ischemic，HI)后實驗組死亡14只，對照組死亡2只，故進入實驗的兩組均為72只。采用Back等的方法建立PVL模型，分別于缺氧后0h、8h、24h、48h、72h、7d處死，HE染色觀察新生大鼠PVL時腦組織病理學改變；DAPI染色檢測缺氧缺血后不同時間點神經(jīng)細胞凋亡；熒光定量RT-PCR檢測缺氧缺血后不

3、同時間點腦組織ephrin-B3mRNA表達變化。SPSS11.0進行統(tǒng)計分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果: 1．腦組織HE染色光鏡觀察：對照組細胞排列有序、胞核大、左右側(cè)腦室對稱。PVL組缺氧缺血后24h即見胼胝體細胞稀疏、排列紊亂；48小時紋狀體內(nèi)細胞稀疏、出現(xiàn)核固縮；7d可見側(cè)腦室旁白質(zhì)呈篩網(wǎng)狀壞死。 2．ephrin-B3mRNA的表達變化：對照組大鼠腦白質(zhì)中ephrin-B3mRNA表達各時

4、間點無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；實驗組大鼠腦白質(zhì)中ephrin-B3mRNA表達在缺氧缺血后8h開始升高，72小時達到峰值，7天開始下降，組內(nèi)不同時間點兩兩比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，與對照組比較，在8h、24h、48h、72h、7d差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 3．細胞凋亡檢測：對照組大鼠腦室周圍白質(zhì)紋狀體、胼胝體區(qū)在各個時間點均有少量凋亡細胞，實驗組大鼠紋狀體和胼胝體區(qū)細胞凋亡指數(shù)(apo

5、ptosis index,AI)在缺氧缺血后8小時開始升高，48小時達到高峰，72小時開始降低，與對照組相比，在8h、24h、48h、72h差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，7天時與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結(jié)論: 1．腦組織HE染色光鏡觀察發(fā)現(xiàn)實驗組大鼠缺氧缺血后出現(xiàn)細胞稀疏、排列紊亂、核固縮、側(cè)腦室旁白質(zhì)篩網(wǎng)狀壞死，符合PVL病理改變，且出現(xiàn)生長發(fā)育不良、神經(jīng)行為異常，證實PVL模型制作成功。

6、 2．新生大鼠PVL時，腦白質(zhì)ephrin-B3mRNA表達顯著增加，而對照組ephrin-B3mRNA表達幾乎沒有變化，提示ephrin-B3參與了PVL缺氧缺血性腦損傷，可能與CNS神經(jīng)元再生抑制機制有關(guān)。 3．新生大鼠PVL時，腦組織細胞凋亡指數(shù)較對照組明顯增加，證實細胞凋亡仍為未成熟鼠腦缺氧缺血(Hypoxic-ischemic，HI)損傷的主要病理形式，其參與了PVL的損傷過程。 4．新生大鼠PVL時，腦組